血友病A患者F8基因突变检测方法的建立及临床应用  

Development and application of molecular diagnostic method of hemophilia A

作　　者：刘安[1] 杨海平[2] 马定远[1] 谷变利 宋雅洁[3] 罗春玉[1] 张菁菁[1] 林颖[1] 王玉国[1] 许争峰[1] 

机构地区：[1]南京医科大学附属南京妇幼保健院遗传医学中心,210004 [2]河南科技大学第一附属医院血液科 [3]河南科技大学第一附属医院肿瘤表观遗传实验室

出　　处：《中华检验医学杂志》2016年第7期496-500,共5页Chinese Journal of Laboratory Medicine

基　　金：江苏省医学创新团队与领军人才课题（LJ201109）;江苏省临床医学科技专项（BL2012039）;江苏省自然科学基金（BK20141076）;江苏省卫生厅科技项目（H201343,F201216）

摘　　要：目的：应用 Ion Torrent 半导体测序技术建立血友病 A（HA）的 F8基因致病突变检测方法并探讨其临床应用价值。方法方法学建立。应用长距离 PCR（LD－PCR）对9例 HA 患者进行 F8基因22号内含子倒位和1号内含子倒位检测，倒位阴性患者应用 Ion Torrent 半导体测序技术检测 F8基因致病突变，对发现的致病突变进行 Sanger 测序验证。对8个家系中11例女性受检者进行 HA 携带者检测，并对其中1例孕妇进行胎儿产前基因检测。结果患者检测发现4例错义突变（c．1331A＞C， c．1648C ＞T， c．6506G ＞A， c．6544C ＞T），2例移码突变（c．2393＿2394insT， c．6320delG），1例剪接突变（IVS5＋5G ＞A），1例无义突变（c．43C ＞T），1例内含子22倒位突变。在11例女性受检者中，10例为携带者，1例不携带母源致病突变。 对 1例患病高风险胎儿进行产前基因检测，结果表明胎儿未遗传母亲致病突变。 Sanger 测序验证结果证实8个突变位点真实存在，与高通量测序结果一致。结论成功建立了基于 Ion Torrent 半导体测序技术检测 F8基因突变的方法，该方法检测周期短、通量大，是 F8基因突变筛查的有效方法。Objective To develop and validate a method for detecting factor 8 gene （F8） mutations in hemophilia A patients by Ion Torrent semiconductor sequencing .Methods Intron 22 and intron 1 inversions of F8 gene were identified by long distance PCR （LD-PCR）, other mutations in the F8 gene were identified by Ion Torrent sequencing.Candidate variants were validated by Sanger sequencing .Sanger sequencing was applied to screen HA carriers from 11 female family members in the 8 pedigrees.One pregnant woman was offered prenatal diagnosis via analyzing the fetal DNA obtained through amniocentesis . Results Four missense mutations （ c.1331A 〉C, 1648C 〉T, c.6506G 〉A, c.6544C 〉T）, two frameshift mutations （ c.2393 _2394insT, c.6320delG）, one splicing mutation （ IVS5 ＋5G 〉A）, one nonsense mutation （c.43C 〉T） and one Inv22 mutation were identified in all nine probands respectively . Among 11 female family members, 10 females were identified to be HA carriers, and one didn′t carry the maternal pathogenic mutation.Prenatal diagnosis result showed that the fetus inherited the wild -type maternal allele and was predicted to be unaffected by HA .Conclusion The targeted Ion Torrent sequencing is a reliable and efficient method to detect F8 mutations in patients with Hemophilia A disease .

关 键 词：基因Ⅷ 突变 FACTOR Ⅷ 

分 类 号：R554.1[医药卫生—血液循环系统疾病] R440[医药卫生—内科学]