PMA与ddPCR结合检测单核细胞增生李斯特氏菌  被引量:3

Detection of Live Listeria monocytogenes by PMA-ddPCR

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作  者:王静 崔凤杰 秦燕 贾俊涛[2] 魏玮 张慧敏 

机构地区:[1]威海出入境检验检疫局检验检疫技术中心,山东威海264205 [2]山东出入境检验检疫局,山东青岛266500

出  处:《食品研究与开发》2016年第21期114-118,共5页Food Research and Development

基  金:国家质检总局科技计划项目(2014IK114)

摘  要:将叠氮溴化丙锭(PMA)与微滴数字PCR(dd PCR)技术相结合,检测热灭活背景下单核细胞增生李斯特氏菌活菌。结果表明,PMA终浓度为5.0μg/m L、曝光时间为15 min时,可以有效抑制10^5 CFU/m L的单核细胞增生李斯特氏菌死菌DNA的PCR扩增,不抑制单核细胞增生李斯特氏菌活菌DNA扩增的PMA最高浓度是10.0μg/m L。利用PMA处理死活菌混合液时,PMA-dd PCR可以在死菌存在的条件下,定量检测活菌,降低了"假阳性"结果的出现。检测结果显示:PMA-dd PCR灵敏度是2.0 copy/20μL。利用PMA-dd PCR检测人工污染的鳕鱼样品,最低可检出10~2 CFU/m L的单核细胞增生李斯特氏菌。结果证明PMA-dd PCR方法的精确度、稳定性良好。A method to detect living cells of Listeria monocytogenes was developed based on propidium monoazide (PMA) and ddPCR. The optimization of experimental parameters showed that a final PMA concentration of 5.0 μg/mL and exposure of 15 min could restrain DNA amplification of 105 CFU/mL dead cells, and the maximum PMA against DNA amplification from live Listeria monocytogenes cells was 10.0 μg/mL. Only live Listeria monocytogenes cells was detected by PMA-ddPCR even in the existence of dead Listeria monocytogenes. The detection limit was 2.0 copy/20μL. PMA-ddPCR could detect 102 CFU/mL Listeria raonocytogenes in the codfish polluted by manual work. Furthermore, PMA-ddPCR showed better accuracy and stability.

关 键 词:叠氮溴化丙锭 微滴式数字PCR 单核细胞增生李斯特氏菌 活菌 

分 类 号:TS207.4[轻工技术与工程—食品科学]

 

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