重组毕赤酵母表达棘孢木霉几丁质酶gene02524的酶学性质及抑菌活性  

Enzymatic properties and antibacterial activity of recombinant Pichia pastoris expressing chitinase gene02524 from Trichoderma asperellum

作　　者：尹义旭 汤伟[1] 咸洪泉[1,2] Yin Yixu

机构地区：[1]青岛农业大学生命科学学院,山东青岛266109 [2]山东省应用真菌重点实验室,山东青岛266109

出　　处：《江苏农业科学》2022年第9期96-103,共8页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：山东省重点研发计划(编号:2018GNC110024);山东省青岛市科技惠民示范引导专项(编号:21-1-4-ny-5-nsh)。

摘　　要：几丁质酶是催化降解几丁质的水解酶,在防治植物真菌病害与虫害方面的应用越来越广泛,是一种重要的生防蛋白。棘孢木霉TD3104是一株优良的植物病害生防菌,几丁质酶在抑菌防病过程中发挥重要作用。为克隆表达棘孢木霉TD3104几丁质酶基因gene02514,明确酶学性质和抑菌活性,利用毕赤酵母表达系统对目的蛋白进行表达,并通过SephadexG-100凝胶进行纯化,对序列进行分析并研究其酶学性质及进行体外抑菌试验。本研究成功地构建了pPIC9K/gene02524重组载体,并且经过比对发现其包含GH18家族的特征氨基酸序列,获得了毕赤酵母转几丁质酶基因工程菌,表达的重组几丁质酶表观分子量44.4 ku,K_(m)=2.0482 g/L,V_(max)=0.6355×10^(3)μmol/(L·min),最适反应温度为50℃,最适pH值为5.0,在pH值为3.5时稳定性最高;金属离子Cu^(2+)、Hg^(2+)可强烈抑制酶活性;可抑制金黄壳囊孢菌等病原真菌的生长。研究结果为解析棘孢木霉几丁质酶在生防中的作用及功能奠定了基础,并为植物病虫害的防治提供了新的基因资源。

关 键 词：棘孢木霉 几丁质酶 基因表达 毕赤酵母 酶学性质 

分 类 号：S188.3[农业科学—农业基础科学]