1株产纤维素酶细菌的内切-β-葡聚糖苷酶的分离纯化及其酶学性质  

Isolation and purification of endo-beta-glucanase from a cellulase-producing bacterium and its enzymatic properties

作　　者：郭建华[1] 蒋海娇 郭宏文[1] 邹东恢[1] 王燕[1] Guo Jianhua

机构地区：[1]齐齐哈尔大学食品与生物工程学院,黑龙江齐齐哈尔161006

出　　处：《江苏农业科学》2022年第16期227-234,共8页Jiangsu Agricultural Sciences

基　　金：黑龙江省教育厅基本业务专项(编号:135109257);黑龙江省省属高等学校基本科研业务费科研项目(编号:135309209)。

摘　　要：为对1种细菌来源的内切-β-葡聚糖苷酶进行分离纯化和酶学性质研究,利用盐析沉淀、凝胶层析、疏水层析和弱阳离子交换色谱等对细菌菌株DM-4所产内切-β-葡聚糖苷酶进行了分离纯化,利用SDS-PAGE电泳对其纯度和分子量进行检测,考察温度和pH值对酶活力的影响,最后计算酶的反应动力学常数。结果显示,经分离纯化,获得2个酶活组分CMC酶Ⅰ和酶Ⅱ,其纯化倍数分别为45.94倍和32.27倍,回收率分别为14.66%和8.33%。CMC酶Ⅰ和酶Ⅱ分子量分别为38.99、45.53 ku,其最适作用温度分别为55~60℃和55℃,最适pH值均为7.5。温度低于70℃时,2种酶组分均对热稳定,并在pH值为6.0~8.0范围内具有良好稳定性。CMC酶Ⅰ的K_(m)为2.55 g/L,V_(m)为37.59μg/(min·mL);CMC酶Ⅱ的K_(m)值为4.37 g/L,V_(m)为28.82μg/(min·mL)。结果表明,采用盐析沉淀、凝胶层析、疏水层析和弱阳离子交换色谱多种分离技术对菌株DM-4所产内切-β-葡聚糖苷酶具有良好的分离纯化效果,经凝胶电泳检测,酶组分达电泳级纯度。酶学性质表明,菌株DM-4所产的2种CMC酶组分均为中性偏碱性纤维素酶,这与霉菌来源的纤维素酶有所不同。

关 键 词：纤维素酶产生菌 内切-β-葡聚糖苷酶 分离纯化 酶学性质 

分 类 号：S182[农业科学—农业基础科学]