血小板第四因子在原核中的高效表达、分离纯化及活性测定  

Expression purification and characterization of platelet factor four from Escherichia coli

作　　者：顾洁[1] 刘拥军[1] 卢士红[1] 蔡英林[1] 刁世勇[1] 韩忠朝[1] 

机构地区：[1]中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所实验血液学国家重点实验室,天津300020

出　　处：《生物技术》2002年第6期7-9,共3页Biotechnology

基　　金：国家杰出青年科学基金 ( 3972 5 0 1 4);攀登计划专项基金资助项目 ( 95 -专 - 1 0 )

摘　　要：构建重组表达质粒pET - 32c PF4 ,并在原核中进行表达 ,以探讨其对白血病细胞系 (HEL)细胞增殖的作用。方法 :通过PCR方法从含有PF4基因的PQE - 6 0 PF4质粒中扩增PF4 ,用NcoⅠ HindⅢ双酶切 ,克隆到原核表达质粒pET - 32C中 ,使之在BL2 1表达 ,Ni-ChelatingSepharose亲和柱纯化 ,用细胞集落形成方法研究重组PF4对HEL的抑制作用。结果 :菌株筛选后在大肠杆菌中获得可溶性高效表达 ,重组PF4占菌体总蛋白的 2 2 %。肠激酶酶切除去N -端融合部分 ,获得了高纯度的重组人血小板第四因子 (rh -PF4 ) ,纯度为 95%以上。活性实验发现重组PF4可抑制HEL细胞集落的形成 ,抑制率为 4 7%。结论 :原核表达质粒pET - 32C可高效可溶性表达PF4 ,重组PF4对HEL细胞的增殖有抑制作用。Objective:To construct a recombinant plasmid pET-32c/PF4 and express recombinant PF4 in E.coli and investigate effect of the recombinant PF4 on the proliferation of human erythroleukaemia cell line (HEL).Methods:The cDNA of PF4 was amplified from pQE-60/PF4 by PCR and subcloned in the pET32c expression vector and expressed in BL21.The recombinant protein was purified by chromatography.Colony-formation assay was used to determine bioactivities of the recombinant protein.Result:The fusion protein was expressed in a high expression level about 22% of the total cell protein.The recombinant protein could suppress colony-formation of HEL cell by 47%.Conclusions:PF4 can be expressed in E.coli as a soluble protein by pET32c.After enterokinase digestion and purification,it can suppress the proliferation of HEL cell.

关 键 词：血小板第四因子 原核 高效表达 分离纯化 活性测定 

分 类 号：R394.8[医药卫生—医学遗传学] R973.[医药卫生—基础医学]