发夹状核酶G_(11)突变对体外切割活性的影响  

作　　者：宋宇虎[1] 林菊生[1] 孔心涓[1] 刘南植[1] 王南下[1] 李斌[2] 金由辛[2] 

机构地区：[1]华中科技大学同济医学院附属同济医院肝病研究所,武汉430030 [2]中国科学院上海生命科学院生物化学和细胞生物学研究所分子生物学国家重点实验室,上海200031

出　　处：《自然科学进展》2003年第4期404-407,共4页

基　　金：卫生部课题基金(98-1-140);中国科学院重大项目(NO KSCX2-2-204)资助

摘　　要：为了研究发夹状核酶结构中G_(11)特定核苷酸对于其体外切割活性的影响,用^(32)P标记长度为267nt含有乙型肝炎病毒C区 pKC的体外转录物作为靶 RNA,把合成的 G_(11)位突变的发夹状核酶基因片段克隆入自剪切核酶载体 p1.5内形成pHpRz ;利用^(32)P标记pHpRz的体外转录物,凝胶电泳进行核酶的鉴定和纯化。把未标记的各种核酶与同位素标记的靶RNA在不同条件下进行切割反应,凝胶电泳,放射自显影分析反应结果。切割结果显示与底物的靶序列完全互补的发夹状核酶具有最高的切割活性,随着与靶序列的互补能力降低发夹状核酶的切割活性逐渐下降,甚至消失,这表明发夹状核酶结构中的G_(11)位点对于发夹状核酶的切割活性不是必需的,所以与发夹状核酶的G_(11)位点相对应的靶序列的选择不受此位点的限制。

关 键 词：发夹状核酶 G11位点 点突变 体外切割活性 酶反应动力学 酶活性 酶结构 

分 类 号：Q783.1[生物学—分子生物学] Q754