国家自然科学基金(30771538)

作品数：11被引量：31H指数：3
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转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选
《安徽农业科学》2014年第24期8099-8101,8166,共4页王春生 李咏乐 仇雨歌 朴善花 安铁洙 
中央高校基本科研业务费专项资金项目(DL13EA06-02);国家自然科学基金项目(30771538)
[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法。[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞。[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞...
关键词：山羊 乳腺特异表达载体 BRAZZEIN基因 转基因细胞 
转KAP6.1-GFP-蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：1
《中国农业科学》2011年第12期2561-2566,共6页王春生 原璐 宁方勇 吴治昊 朴善花 安铁洙 
国家自然科学基金资助项目(30771538);国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B)
【目的】通过体细胞核移植为获得皮肤特异表达蜘蛛拖丝蛋白的绵羊奠定基础。【方法】将pcDNA3.1和带有角蛋白结合蛋白启动子质粒pGM-T-KAP6.1分别用BglⅡ和Hin dⅢ双酶切后连接,再与蜘蛛拖丝蛋白基因核心序列4S连接,最后通过酶切与pIRES...
关键词：蜘蛛拖丝蛋白基因 角蛋白启动子 真核表达载体构建 绵羊成纤维细胞 转基因 
拟蜘蛛拖丝蛋白基因在小鼠颗粒细胞中的整合及其鉴定
《黑龙江畜牧兽医》2011年第4期1-3,7,共4页张滕子 王春生 李晶 宁方勇 朴善花 安铁洙 
国家自然科学基金项目(30771538);东北林业大学引进人才科研启动基金项目
为了探讨拟蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体（2S）在小鼠颗粒细胞基因组中整合和建立转拟蜘蛛拖丝蛋白基因的小鼠颗粒细胞系的可能性,试验将在前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S连接到具有CMV启动子、IRES序列和GFP报告基因的表达载体,...
关键词：拟蜘蛛拖丝蛋白基因 小鼠颗粒细胞 整合 鉴定 
小鼠超高硫角蛋白基因启动子的克隆及其表达活性分析被引量：2
《中国实验动物学报》2010年第6期471-474,I0006,共5页李昊 王春生 宁方勇 梁洋 朴善花 安铁洙 
国家自然科学基金资助(编号:30771538);东北林业大学引进人才科研启动基金资助
目的筛选在小鼠毛囊中具有高表达活性的内源启动子,为建立小鼠被毛特异表达外源蛋白的转基因技术奠定基础。方法以小鼠基因组为模板,克隆得到超高硫角蛋白基因启动子超高硫角蛋白(UHS),将其分别与pβgal-Basic和pAcGFP1-N1载体连接,构...
关键词：超高硫角蛋白 启动子 分子克隆 活性分析 
小鼠早期胚胎的EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25玻璃化法冷冻保存被引量：3
《江西农业大学学报》2010年第6期1248-1252,共5页梁洋 杜文敬 王春生 朴善花 安铁洙 
国家自然科学基金资助项目(30771538)
为了筛选适合用于小鼠不同发育时期胚胎的玻璃化冷冻方法,采用EFS20/40、EFS40、DAP213和GP25法分别冷冻保存不同发育期的小鼠胚胎。结果表明,采用EFS20/40法冷冻的2细胞期胚经解冻后发育至扩张囊胚的比率(93%)显著高于EFS40、DAP213和G...
关键词：小鼠 早期胚胎 玻璃化冷冻保存 体外培养 
逆转录病毒载体的研究进展被引量：3
《黑龙江畜牧兽医》2010年第9期26-28,共3页梁洋 杜文敬 苏畅 安铁洙 
国家自然科学基金项目(30771538)
基因传递技术被广泛应用于基因治疗、基因改造等领域,其中逆转录病毒载体由于其遗传的稳定性、转染的高效性而得到迅速地发展。作为传递基因的工具,打靶到特定组织和细胞的能力、效率、目的基因的表达情况及生物安全性问题都值得深入探...
关键词：逆转录病毒 载体 基因传递 
室温下保存的小鼠屠体卵巢GV卵的发育能力
《四川动物》2009年第6期856-858,共3页杜文敬 安星兰 王春生 朴善花 安铁洙 
东北林业大学引进人才科研启动基金;国家自然科学基金项目资助(30771538)
将ICR系雌性小鼠处死并在10℃、15℃、20℃和25℃下依次保存8、14、24和48h后,采集其体内的卵巢GV期卵,采用常规方法进行体外成熟和体外受精,获得的2细胞期胚经体外培养或胚胎移植观察其发育能力。其结果,在10℃下保存24h、15℃下保存14...
关键词：小鼠 室温保存 GV期卵 体外成熟 体外受精 
转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株的筛选被引量：11
《畜牧兽医学报》2009年第8期1262-1265,共4页王春生 刘欣 原璐 安铁洙 
国家自然科学基金资助项目(30771538);东北林业大学引进人才资助项目
为了筛选转pK2.10-拟蜘蛛拖丝蛋白基因绵羊成纤维细胞株,本研究参照GenBank上蜘蛛拖丝蛋白基因序列(AY555585和AH015065)设计并人工合成拟蜘蛛基因四聚体(4S),与pcDNA3.1载体(K2.10启动子)相连构建真核表达载体(pcDNA3.1-K2.10-4S),采...
关键词：拟蜘蛛拖丝蛋白基因 载体构建 转染 绵羊成纤维细胞 
绵羊高硫角蛋白启动子表达活性研究被引量：2
《中国畜牧兽医》2009年第6期61-64,共4页罗芳 王春生 刘欣 安铁洙 
国家自然科学基金(30771538);东北林业大学引进人才科研启动基金
角蛋白是羊毛主要结构蛋白,为了筛选在绵羊毛囊中具有高表达活性高硫角蛋白的内源启动子,本研究以绵羊基因组为模板,克隆得到高硫角蛋白基因启动子B2C,将B2C与去除CMV启动子的pAcGFP1-N1载体连接,构建了重组真核表达载体。采用阳离子脂...
关键词：高硫角蛋白 启动子 分子克隆 活性分析 
小鼠Klf4基因的克隆及原核表达分析被引量：7
《中国实验动物学报》2009年第2期103-107,共5页王春生 罗芳 杜文敬 安铁洙 
国家自然科学基金资助(编号:30771538);东北林业大学引进人才科研启动基金资助
目的克隆Klf4基因并对其重组蛋白进行原核表达及分析。方法提取胎鼠皮肤mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点引物,从该cDNA中扩增出Klf4基因编码区序列,将其克隆到pEasy-T3载体上。对质粒双酶切并回收其中Klf4基因片段后...
关键词：KLF4 克隆 原核表达 
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