直接克隆

作品数：24被引量：33H指数：3
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ExoCET-BAC策略高效抓取和组装高AT含量基因组大片段
《合成生物学》2022年第1期238-251,共14页姜婵娟 崔天琦 孙洪娈 焦念志 符军 张友明 王海龙 
山东省泰山学者项目(tsqn201812008);山东大学齐鲁青年学者项目。
基因克隆是解析基因功能的重要手段,但仍有很多基因难以克隆,比如高AT含量(>60%)基因组来源的DNA。ExoCET克隆技术通过联合核酸外切酶介导的体外同源重组和大肠杆菌RecET重组酶介导的细胞内同源重组,不仅能从微生物基因组中靶向抓取>100...
关键词：难克隆DNA 高AT含量 基因组 同源重组 直接克隆 DNA组装 ExoCET 
基于紫外诱变与生物合成基因簇倍增的多氧霉素高产菌株构建被引量：1
《合成生物学》2020年第5期609-620,共12页刘如欣 杜磊 徐晓庆 丁金鹏 张伟 李盛英 
国家自然科学基金(32025001,31800041)。
多氧霉素是一种抑制几丁质生物合成的广谱抗真菌类抗生素,对多种真菌引起的农作物病害具有显著的防治效果,且对人和动植物无害,是一种绿色安全的生物农药,目前仍然是全球应用最广泛的抗真菌农药之一。多氧霉素的主要作用机制在于竞争性...
关键词：多氧霉素 链霉菌 紫外诱变 ExoCET直接克隆 基因工程育种 
基于rDNA-ITS序列对黑枸杞内生真菌分类鉴定
《生物化工》2020年第1期65-68,共4页杨小朵 蓝秋菊 韦冠宇 郑敬晖 刘俊林 
目的:对黑枸杞中分离的10株内生真菌进行种属的分类鉴定,为研究10株内生真菌的初级和次级代谢产物奠定基础。方法:本实验采用组织块分离法从药用植物黑枸杞中分离出10株内生真菌,使用光学显微镜对菌株形态进行观察,并对其rDNAITS(ITS1-5...
关键词：内生真菌鉴定 菌落特征 直接克隆 
发光杆菌TT01中Tc毒素复合体基因簇的直接克隆
《激光生物学报》2018年第1期36-44,共9页李纯 陈汉娜 谢芝玲 潘登 丁学知 夏立秋 涂强 张友明 
湖南省发展生物工程和新产品合作创新中心(20134486);山东大学第八批博士后国际交流项目B类资助
本研究通过NCBI数据分析得知Photorhabdus luminescens TT01基因组中表达Tc毒素蛋白复合体的基因簇包含了6个相关的Tc毒素基因,分别为tcaZCB(plu0514-0515)、tccAB3(plu0805-0806)、tccAB1(plu4165-4169)、tcd(plu0960-0971)、tccC4(plu...
关键词：发光杆菌 Red/ET直接克隆 Tc毒素复合蛋白 基因重组 
Red/ET同源重组技术及其在微生物基因组挖掘中的应用进展被引量：6
《微生物学报》2017年第11期1735-1746,共12页郑文韬 张友明 卞小莹 
国家自然科学基金(31500033;31670097;31670098);国家重点研发计划(2017YFD0201405)~~
Red/ET同源重组技术(Red/ET recombineering)是由来源于大肠杆菌λ噬菌体的蛋白对Redα/Redβ或来源于Rac原噬菌体的蛋白对Rec E/Rec T所介导的基于短同源臂(40–50 bp)的同源重组技术,能对宿主DNA序列进行快速、高效、精确的修饰和操...
关键词：Red/ET同源重组技术 直接克隆 遗传工程 基因组挖掘 次级代谢产物 异源表达 
染色体上大片段DNA的直接克隆及移植被引量：1
《中国科学：生命科学》2016年第2期183-191,共9页朱莹 杨艳 邓平平 黄勇 倪孟祥 方宏清 
国家重点基础研究发展计划(批准号:2011CBA00800);国家自然科学基金(批准号:81373286)资助
应用Red重组体内直接克隆染色体上大于10 kb的DNA序列非常困难.利用一种抗性拆分-融合策略成功地从供体菌染色体上直接克隆了约50 kb的DNA序列,并将其移植到受体菌的染色体上.首先将抗性基因(如cat)的互补片段cmb定向整合到染色体上拟...
关键词：RED同源重组 抗性拆分-融合 直接克隆 移植 
利用抗性互补策略直接克隆染色体上大片段DNA被引量：1
《生物技术通讯》2015年第4期565-569,共5页杨艳 朱莹 朱美勤 韦炎龙 倪孟祥 方宏清 
国家重点基础研究发展计划(2011CBA00800);国家自然科学基金(81373286)
目的:利用抗性互补策略提高Red重组介导的体内直接克隆效率。方法:将抗性基因(如cat)拆分为互补的两部分Cma、Cmb(部分与Cma同源),这两部分单独均不具有抗性,仅当融合在一起时才有抗性。首先将Cmb定向整合到染色体上拟克隆区域的一侧,...
关键词：RED同源重组 抗性互补 直接克隆 
体内直接克隆大片段DNA的研究进展被引量：1
《中国生物工程杂志》2014年第4期95-100,共6页朱莹 倪孟祥 方宏清 
国家重点基础研究发展计划(2011CBA00800);国家自然科学基金(30870049;81373286)资助项目
基因组序列的功能分析以及代谢途径的构建改造等都需要克隆目的 DNA。获得大片段DNA序列的方法有构建和筛选基因文库,PCR扩增,体外大片段DNA合成和组装等,但体内重组直接克隆的方法在操作、克隆长片段和应用等方面更具优势。介绍了Red/E...
关键词：直接克隆 RED ET 体内重组 
玉米纹枯病抗性相关miRNA的鉴定与功能分析被引量：5
《中国生物化学与分子生物学报》2012年第12期1122-1132,共11页罗茂 彭华 高健 潘光堂 张志明 
国家高技术研究发展计划项目(863计划;No.SS2012AA100107;No.2012AA10A300);国家自然科学基金项目(No.30900901);高产转基因玉米新品种培育(No.2011ZX08003-003);四川省教育厅面上基金(No.11ZB123)资助~~
MicroRNA(miRNA)是一类内源性非编码小分子RNA,通过指导剪切或者抑制翻译等方式调节植物基因的表达,参与调控植物的生长发育,并在多种非生物与生物胁迫响应中发挥重要作用.但目前关于玉米纹枯病抗性相关miRNA表达调节与功能尚不十分清楚...
关键词：microRNA(miRNA) 玉米 直接克隆 生物信息学 靶基因预测 实时荧光定量 
从兔外周血直接克隆IgG重链可变区被引量：1
《解剖学报》2012年第6期762-766,共5页周世权 廖智 杨林 周吉航 刘晓光 
浙江省科技计划面上社会发展资助项目(2009C33128)
目的从兔外周血总RNA中直接扩增出IgG重链可变区基因。方法先从IMGT/GENE-DB数据库中获取编码大耳白兔免疫球蛋白(Ig)重链可变区(VH)的3个胚系基因片段VH(IGHV)、D(IGHD)和JH(IGHJ),以及编码γ重链恒定区(CH)基因Cγ(IGHG)的cDNA序列,...
关键词：外周血 免疫球蛋白 重链 可变区 反转录-聚合酶链反应 序列分析 兔 
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