WSSV-VAP1基因克隆及在毕赤酵母中的表达  

Cloning and expression of white spot syndrome virus (WSSV)-VAP1 gene in Pichia pastoris

作　　者：刘庆慧 [1] 韩文君 [2] 黄倢 [2] 王清印 [2] 

机构地区：[1]中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛,266071,中国海洋大学,青岛,266003 [2]中国水产科学研究院黄海水产研究所,青岛,266071

出　　处：《高技术通讯》2005年第5期67-70,共4页Chinese High Technology Letters

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)，国家自然科学基金

摘　　要：根据 WSSV-黏附蛋白(VAP1)基因序列设计了一对引物,在5'引物和3'引物中分别引入EcoRI和XbaI酶切位点.经PCR扩增,将VAP1基因克隆至穿梭载体pGAPZαA之GAP启动子下游位点,构建成含α-factor信号肽的重组表达载体,获得的重组质粒pGAPZαA-VAP1经线性化后转入毕赤氏酵母SMD1168菌株,构建成分泌型表达VAP1的酵母工程菌株.SDS-PAGE和Western-blot及结合活性检测分析表明,VAP1基因在该体系中得到成功表达,表达产物与对虾细胞膜具明显的结合活性.

关 键 词：基因克隆 毕赤酵母 WESTERN-BLOT SDS-PAGE 重组表达载体 PCR扩增 毕赤氏酵母 分泌型表达 序列设计 酶切位点 穿梭载体 重组质粒 工程菌株 活性检测 P1基因 结合活性 表达产物 启动子 GAP 信号肽 线性化 分析表 细胞膜 

分 类 号：Q785[生物学—分子生物学] Q786