截短的人精子特异性乳酸脱氢酶L178X突变体丧失催化活性  

Truncated Human Sperm-specific Lactate Dehydrogenase L178X Mutant Loses Catalytic Activity

作　　者：颜水堤[1] 张朵[1] 曾健[1] 富显果[1] 柯龙凤[1] 兰风华[1] 

机构地区：[1]福建医科大学福总临床医学院临床遗传与实验医学科,福州350025

出　　处：《中国生物化学与分子生物学报》2010年第7期678-682,共5页Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology

基　　金：福建省重点科技攻关和全军医药卫生"十五"基金资助项目(No2002Y032;No01MA032)~~

摘　　要：精子特异性乳酸脱氢酶(乳酸脱氢酶C4,LDH-C4)是精子能量代谢的关键酶类之一.为了研究前期发现的1个LDH-C4基因突变(L178X)对LDH-C4功能的影响,在已构建的LDH-C4原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC的基础上,利用PCR定点诱变技术,制备了L178X突变体的原核表达载体pET-28a(+)-hLDHC/L178X,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,诱导其表达.对该载体进行限制性酶切表明,插入的LDHC基因cDNA约1000bp;序列分析表明,该插入片段读框正确,带L178X突变.SDS-PAGE及免疫印迹显示,携带该载体的菌体可表达分子量约25kD的蛋白质,后者可被兔抗LDH-C4血清特异识别.乳酸脱氢酶(LDH)活性测定及活性染色表明,所表达的产物没有LDH活性.本研究成功进行了LDH-C4的1个突变体的原核表达,为研究LDHC基因突变对LDH-C4功能以及男性生育的影响奠定了基础.

关 键 词：精子特异性乳酸脱氢酶 LDH-C4 基因突变 LDHC基因 原核表达 

分 类 号：R394.3[医药卫生—医学遗传学]