重组大肠杆菌产γ-环糊精葡萄糖基转移酶的摇瓶发酵优化  

Optimization of Fermentation in Shake Flasks for Recombinant γ-CGTase Expression in E.coli

作　　者：纪丽萍[1,2] 吴丹[1,2] 吴敬[1,2] 陈坚[1,2] 

机构地区：[1]江南大学食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122 [2]江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,无锡214122

出　　处：《中国生物工程杂志》2011年第10期50-56,共7页China Biotechnology

基　　金：中央高校基本科研业务费专项资金(JUSRP20917)

摘　　要：为了实现来源于碱性芽孢杆菌Alkalophilic Bacillus clarkii 7364的γ-环糊精葡萄糖基转移酶的高效胞外表达,对OmpA信号肽介导的E.coli BL21(DE3)/pET20b(+)-γcgt基因工程菌进行发酵培养基及发酵条件的优化,并进行正交试验,获得最优培养基:甘油5g/L、蛋白胨6g/L、酵母膏24g/L、钙离子6mmol/L、镁离子2mmol/L、甘氨酸0.75%、PO43-0.1mol/L;在此基础上最适发酵条件:pH 6.5、25℃培养、装液量30ml/250ml、转速220r/min、0.02%SDS、在发酵10h时利用5g/L乳糖进行诱导,使得酶活从初始的5189.2U/ml提高到20268.8U/ml。研究结果得到高效表达的培养条件,为实现该酶的工业化应用打下了基础。In order to achieve efficient extracellular production of γ-cyclodextrin glycosyltransferase（γ-CGTase）,E.coli BL21（DE3） carrying the γ-cgt gene of Alkalophilic Bacillus clarkii 7364 was investigated.By comparison of different culture media and conditions,got the optimized medium： 5g/L glycerol,6g/L peptone,24g/L yeast extract,6mmol/L Ca2＋,2mmol/L Mg2＋,0.75% glycine,the optimized conditions： cultivated in 25℃,220r/min,30ml/250ml,pH 6.5,induced by 5g/L lactose at 10h of culture,which contained 0.02% SDS,the enzyme activity rised from 5189.2U/ml to 14683.4U/ml.

关 键 词：重组大肠杆菌 环糊精葡萄糖基转移酶 发酵优化 

分 类 号：TQ925.9[轻工技术与工程—发酵工程]