HSV/AAV嵌合病毒法制备rAAV/hFⅨ及其安全性检测  

作　　者：陈立[1] 邹蓓艳[1] 陈浩明[1] 伍志坚[2] 吴小兵[2] 卢大儒[1] 薛京伦[1] 

机构地区：[1]基因工程国家重点实验室,复旦大学生命科学院遗传学研究所,上海200433 [2]中国预防医学科学院病毒学研究所,北京100052

出　　处：《科学通报》2003年第10期1054-1058,共5页Chinese Science Bulletin

摘　　要：构建了由CMV启动子调控的人凝血因子Ⅸ小基因的重组腺相关病毒载体, 并通过HSV/AAV杂合辅助病毒的方法大量制备成重组腺相关病毒颗粒(rAAV/hFⅨ). 经Southern dot blot及QC-PCR法测定, 滴度达到3.6 × 1012 vg(病毒基因组)/mL. 将rAAV/hFⅨ病毒以7.5 × 1011 vg/只直接注射到血友病B小鼠股四头肌中, 检测到人Ⅸ因子最高表达量达到387 ng/mL血浆, 持续表达时间12周. 血浆中产生的抗体情况与表达曲线相吻合. 实验结果表明, 采用HSV/AAV杂合辅助病毒法能够有效解决AAV载体的大量制备问题, QC-PCR法检测重组腺相关病毒的滴度比传统的点杂交法更加快速准确. RT-PCR检测表明重组AAV中没有野生型HSV的污染, PCR检测表明重组AAV注射后, 重组AAV病毒仅存在于注射点附近的肌肉中, 未见扩散.

关 键 词：重组腺相关病毒载体 凝血因子 IX小基因 杂合病毒 HSV/AAV嵌合病毒法 血友病B QC-PCR 

分 类 号：R346[医药卫生—基础医学]