天津市自然科学基金(043609211)

作品数：13被引量：25H指数：2
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人脂联素原核表达载体PQE30/ADPN的构建及在大肠杆菌中的表达被引量：1
《天津医药》2008年第11期843-845,共3页史晓文 刘德敏 孙颖 张捷 
天津市教委基金项目(项目编号:2003025);天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:构建人脂联素重组表达载体PQE30/ADPN,并在大肠杆菌宿主系统中表达出脂联素蛋白,对表达产物进行鉴定。方法:将构建好的人脂联素克隆载体PUC57/ADPN与原核表达载体PQE30通过双酶切方法位点特异地连接在一起,再转化入大肠杆菌JM109...
关键词：胞间信号肽类和蛋白质类 基因表达 大肠杆菌 遗传载体 脂联素 
人脂联素基因在L-02细胞中表达及其功能检测被引量：1
《天津医药》2008年第4期246-248,共3页杜春红 刘德敏 
天津市教委基金项目(项目编号:2003025);天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:在人正常肝细胞株L-02中表达外源人脂联素蛋白,并观察其生物学活性。方法:采用脂质体法将成功构建的人脂联素真核表达质粒pcDNA3.1/CT-GFP-TOPO-Adiponectin转染L-02细胞;免疫组织化学定位观察脂联素的表达;Western blot检测培养...
关键词：脂联素 基因表达 基因转移技术 遗传载体 重组蛋白 脂质体 
PPARγ,、TLR4基因多态性与2型糖尿病的相关性研究被引量：8
《天津医药》2008年第3期167-169,共3页胡文超 刘德敏 孙颖 张捷 
天津市教委基金资助项目(项目编号:2003025);天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:探讨天津地区人群中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因Pro12Ala及toll样受体4(TLR4)基因Asp299Gly、Thr399Ile的多态性与2型糖尿病(T2DM)的关系。方法:提取365例T2DM患者(T2DM组)和95例健康人(对照组)的基因组DNA,PCR扩增...
关键词：糖尿病  2型 PPARΓ 多态现象 遗传 突变 色谱法 高压液相 TOLL样受体4 天津 
人脂联素基因在昆虫杆状病毒表达系统中的表达
《基础医学与临床》2007年第12期1319-1323,共5页刘徳敏 丁玉静 孙颖 张捷 
天津市教委基金(2003025);天津市自然科学基金(043609211)~~
目的利用杆状病毒表达系统探讨人脂联素(ADPN)基因在Sf9昆虫细胞中的高效表达。方法利用PCR方法扩增人脂联素基因,与pFastBac1质粒连接,转化入含有穿梭载体bacmid的大肠杆菌DH10Bac中,筛选发生转座作用的重组穿梭载体Bacmid-ADPN并转染S...
关键词：脂联素 杆状病毒 昆虫细胞 表达 
栎精对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达及活性的影响被引量：1
《天津医药》2007年第12期918-920,共3页孙颖 刘德敏 赵慧茹 张捷 
天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:探讨栎精对葡萄糖-6-磷酸酶基因表达及活性的影响。方法:将原代培养的大鼠肝细胞在含有25mmol/L的葡萄糖和不同浓度的栎精培养16h后提取RNA,以半定量RT-PCR方法检测葡萄糖-6-磷酸酶的催化亚基(G6PC)和转运亚基(G6PT)的mRNA水平,并...
关键词：栎精 葡糖-6-磷酸酶 基因表达 RNA 信使 肝细胞 大鼠 WISTAR 
人脂联素基因的原核表达、纯化及活性检测
《天津医药》2007年第9期644-646,共3页刘德敏 杨莉丽 丁玉静 孙颖 于德民 
天津市教委基金资助项目(项目编号:2003025);天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:在大肠杆菌中表达具有活性的重组人脂联素蛋白。方法:利用PCR技术扩增人脂联素基因完全编码序列,选用Gateway原核表达体系,经过BP反应、LR反应两步反应,将PCR产物克隆入pET-DEST42质粒,构建融合表达载体pET-DEST42/attB-adiponect...
关键词：脂联素 克隆 分子 基因表达 肝细胞 重组蛋白质类 葡糖-6-磷酸酶 大肠杆菌 
糖尿病新型分子靶点葡萄糖-6-磷酸酶活性的检测及应用被引量：1
《天津医科大学学报》2007年第4期489-492,共4页孙颖 刘德敏 
天津市自然科学基金资助项目(043609211)
目的:研究利用葡萄糖脱氢酶偶联反应测定葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)的活性,并推荐其作为一种常用的实验室检测方法。方法:以胶原酶原位灌注消化的方法分离大鼠肝细胞,用含10%FBS的1640培养液进行原代培养。待细胞贴壁后分别换用新鲜的...
关键词：葡萄糖-6-磷酸酶 肝细胞 糖尿病 葡萄糖脱氢酶偶联反应 栎精 
绿色荧光蛋白标记的人脂联素真核表达载体的构建被引量：1
《天津医药》2007年第5期324-325,I0003,共3页刘德敏 杜春红 孙颖 张捷 
天津市教委基金项目(项目编号:2003025);天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)标记的人脂联素(Adiponectin)真核表达质粒。方法:用本实验室已构建好的人脂联素克隆载体pMD18-T/Adiponectin为模板,结合已设计好的特异性引物,采用PCR方法克隆出Adiponectin目的片段,将该目的片段再连至真...
关键词：脂类 遗传载体 质粒 绿色荧光蛋白质类 聚合酶链反应 
二甲双胍对糖尿病大鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶表达的影响
《天津医药》2007年第3期197-199,共3页张景云 张秋梅 于德民 刘德敏 
天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:探讨二甲双胍抑制肝糖输出,减轻肝脏胰岛素抵抗的分子学机制。方法:建立糖尿病大鼠模型并将之分为正常对照组、糖尿病组、低剂量二甲双胍干预组、高剂量二甲双胍干预组,饲养2周后取出肝脏,以半定量RT-PCR方法测定肝脏葡萄糖-6-磷酸...
关键词：葡糖-6-磷酸酶 二甲双胍 糖尿病 肝 大鼠 
大鼠肝细胞的原代培养及鉴定被引量：7
《天津医药》2006年第5期322-323,T0001,共3页刘德敏 赵慧茹 杨莉丽 孙颖 
天津市自然科学基金资助项目(项目编号:043609211)
目的:探讨大鼠肝细胞原代培养的方法及细胞的鉴定。方法:采用胶原酶消化获取大鼠肝细胞进行纯化、培养,并采用免疫组织化学方法对其进行鉴定。结果:培养的肝细胞产量高、活力好,用相差显微镜对不同生长时期的肝细胞进行观察证实了细胞...
关键词：肝细胞 细胞培养技术 免疫组织化学 大鼠 
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