国家高技术研究发展计划(2006AA02Z153)

作品数：14被引量：56H指数：5
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相关作者：金坚张莲芬李华钟李洁周利苹更多>>
相关机构：江南大学中国科学院淮海工学院无锡市第三人民医院更多>>
相关期刊：《中国生化药物杂志》《中国药理学通报》《中国生物制品学杂志》《食品与生物技术学报》更多>>
相关主题：毕赤酵母融合蛋白人血清白蛋白分泌表达巴斯德毕赤酵母更多>>
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人β干扰素与人血清白蛋白融合蛋白的表达及纯化被引量：7
《生物工程学报》2009年第11期1746-1752,共7页张琦 雷楗勇 丁月娣 陈蕴 屈琳 陈淑娴 金坚 
国家高技术研究发展计划(863计划)(No.2006AA02Z153)资助~~
为开展人β干扰素-人血清白蛋白融合蛋白(IFNβ-HAS)的临床前研究,本研究采用免疫学方法对毕赤酵母转化子进行筛选,得到高产菌株8株。在5L发酵罐上对高产菌株进行诱导表达,产量达500mg/L。发酵液经超滤浓缩、染料亲和层析、镍离子螯合...
关键词：Β干扰素 融合蛋白 毕赤酵母 
产HSA-CP融合蛋白毕赤酵母的发酵条件优化被引量：4
《生物加工过程》2009年第5期25-28,共4页孔静静 王长城 杨海麟 张玲 周利苹 金坚 王武 
国家高新技术研究发展计划(863计划)资助项目(2006AA02Z153)
为提高重组毕赤酵母生产人血清白蛋白-C肽融合蛋白(HSA-CP)的产量和生产强度,在摇瓶条件下考察了甲醇诱导时间和浓度对目的蛋白产量的影响。结果表明,质量浓度10 g/L的甲醇诱导72 h最适于产物表达。通过对7L发酵罐中各因素的优化,得到...
关键词：HSA—CP融合蛋白 巴斯德毕赤酵母 发酵优化 
王不留行提取物对内皮细胞增殖、迁移及其黏附的作用评价被引量：12
《中国药理学通报》2009年第6期817-819,共3页夏明星 张莲芬 王一君 李英 金坚 
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(No2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(No06DZ19020)
目的体外分析王不留行抑制人微血管内皮细胞(HMEC)增殖、迁移和黏附的有效部位。方法SRB法测定药物干预细胞增殖的IC50和药物作用时间与药效学的关系;划线灼伤法研究细胞迁移;体外基质胶分析药物对细胞黏附能力的影响;HE染色观察药物对...
关键词：细胞增殖 细胞迁移 细胞黏附 作用评价 
人脑钠肽融合蛋白(HSA-(BNP)_2)在毕赤酵母中的发酵条件及纯化研究被引量：1
《药物生物技术》2009年第2期113-117,共5页丁月娣 刘天会 陈蕴 张莲芬 金坚 
国家"863"计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020)
对毕赤酵母工程菌GS115/pPIC9K-HSA-(BNP)2的发酵条件进行了优化,并对表达产物HSA-(BNP)2融合蛋白的纯化工艺进行了摸索。研究表明,菌体生长28h时菌浓较高,可进行诱导;同时,在2%甲醇浓度、培养液浓缩1.5倍、诱导表达72h时融合蛋白产量可...
关键词：脑钠肽 融合蛋白 毕赤酵母 发酵优化 纯化 
人脑钠肽与人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达及其活性被引量：5
《中国生物制品学杂志》2009年第3期226-229,共4页丁月娣 雷楗勇 陈蕴 张莲芬 金坚 
国家"863"计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020)
目的在毕赤酵母中表达重组人脑钠肽(BNP)与人血清白蛋白(HSA)融合蛋白,并检测其活性。方法重叠PCR法拼接BNP二联体与HSA基因,插入表达载体pPIC9K,电穿孔法转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析、Western blot...
关键词：人脑钠肽 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 生物活性 
王不留行中抗人微血管内皮细胞增殖的有效组分的分离和纯化被引量：3
《生物技术通报》2009年第2期93-97,共5页夏明星 冯磊 张莲芬 李英 储敏 金坚 
国家863计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020)
从中药王不留行中筛选具有抑制内皮细胞增殖的有效单一组分。大孔树脂吸附法进行总皂甙的分离纯化,分别收集不同浓度乙醇溶液洗脱液用SRB法进行细胞活性检测,选择有效部分用AKTA Resource柱分离,按紫外吸收峰收集洗脱液并进行活性验证,...
关键词：王不留行 内皮细胞 分离纯化 
白蛋白修饰的人甲状旁腺激素的表达、纯化及活性鉴定被引量：1
《药物生物技术》2009年第1期8-13,共6页王一君 陈蕴 张莲芬 雷楗勇 陈其亮 李英 储敏 金坚 
国家"863"计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020)
采用构建的含人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白(PTH-HSA)的酵母工程菌Pichiapastoris进行表达条件研究,发酵上清中PTH-HSA表达量为171mg/L。发酵液经超滤浓缩。
关键词：甲状旁腺激素 巴斯德毕赤酵母 融合蛋白 纯化 活性 成骨细胞 
重组毕氏酵母中降解hIFN-βHSA蛋白酶的鉴定及其活性控制被引量：1
《生物加工过程》2008年第5期50-54,共5页宋一丹 窦文芳 许泓瑜 金坚 陆茂林 许正宏 
国家863专题计划资助项目(2006AA02Z153);教育部新世纪优秀人才支持计划资助项目(NCET-07-0380);上海市科学技术委员会生物医药重大科技攻关资助项目(06DZ19020)
研究了重组毕赤酵母KM71/pPIC9K-IFNβ-HSA表达融合蛋白hIFNβ-HSA过程中产物降解的问题。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blotting分析结果表明,发酵液中除了9.0×104的目的融合蛋白hIFNβ-HSA外,同时还出现了...
关键词：毕赤酵母 蛋白酶 SDS—PAGE 高效液相色谱 人β干扰素-血清白融合蛋白 抑制剂 
重组人血清白蛋白-hGCSF突变体在毕赤酵母中的表达被引量：3
《中国生化药物杂志》2008年第5期289-293,共5页朱书峰 张莲芬 陈蕴 储敏 李英 金坚 
国家863计划项目(2006AA02Z153)
目的通过定点突变,提高融合蛋白HSA-hGCSF的生物活性。方法结构模拟显示,对hG-CSF中5个氨基酸残基加以突变可以提高其生物活性。通过限制性酶切方法将该突变基因与HSA基因的3′连接,融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,置于...
关键词：hG—CSF 定点突变 融合蛋白 毕赤酵母 
人GCSF-白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：6
《药物生物技术》2008年第2期109-114,共6页徐钰 孙钧铭 张莲芬 窦文芳 李洁 朱威 朱书峰 金坚 
国家"863"计划项目(2006AA02Z153);上海市科委生物医药重大科技攻关项目(06DZ19020);2006江苏省卫生厅科研项目(Z200611)
制备人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)与人血清白蛋白(HSA)的融合蛋白。从新鲜人外周血中分离单核细胞,给予大肠杆菌脂多糖刺激后,RT-PCR制备G-CSF cDNA,以其为模板扩增得到人G-CSF的编码区序列(525 bp)。重叠PCR拼接HSA-GCSF融合基因(2277 ...
关键词：人粒细胞集落刺激因子 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 
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