国家自然科学基金(31272565)

作品数：8被引量：13H指数：2
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相关作者：杜锐时坤李健明曾范利郝俊伟更多>>
相关机构：吉林农业大学教育部吉林正大实业有限公司中国农业科学院特产研究所更多>>
相关期刊：《中国兽医杂志》《动物医学进展》《中国兽医学报》《中国预防兽医学报》更多>>
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水貂阿留申病毒诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡被引量：1
《中国兽医学报》2021年第1期56-61,共6页栾美慧 葛桂阳 宫庆龙 徐宁 郜艳雪 时坤 李健明 刘艺 李东丽 孙志博 冷雪 杜锐 
国家自然科学基金面上资助项目(31272565);吉林省科技发展计划资助项目(20190304004YY)。
为研究水貂阿留申病毒(AMDV)在体外诱导猫肾细胞(CrFK)凋亡情况,用AMDV-G株感染CrFK细胞,采用CCK-8法检测CrFK细胞感染后的细胞存活率,用AO/EB染色法检测CrFK细胞核的形态变化,用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,并通过...
关键词：水貂阿留申病毒 猫肾细胞 细胞凋亡 
ADV分离强毒株全基因突变重组质粒的构建、表达及其免疫原性的分析被引量：2
《中国兽药杂志》2016年第6期9-15,共7页孙利杰 刘东旭 李健明 时坤 冷雪 李东 杜锐 
国家自然基金(NO.31272565)
为研制水貂阿留申病核酸疫苗,应用重叠延伸PCR技术去除ADV VP2基因中编码428~446位氨基酸的核苷酸序列,与pc DNA3.1(^+)载体连接,构建全基因突变重组质粒pc DNA3.1-ADV-428,在此基础上,截去编码487~501位氨基酸的核苷酸序列,构建全基因...
关键词：水貂阿留申病毒 真核表达载体 反应原性 免疫原性 
水貂阿留申病毒VP2蛋白Dot-ELISA检测方法的建立被引量：4
《中国预防兽医学报》2015年第8期619-622,共4页李晶 时坤 曾范利 张妍 孙凡婷 刘杨 杜锐 
国家自然科学基金(31272565);吉林省经济动物疾病防治创新(20130521023JH)
为建立一种适合于基层快速检测水貂阿留申病毒(ADV)的检测方法,本研究将ADV的VP2基因经重叠延伸PCR法进行扩增后克隆至表达载体p GEX-4T-1中进行原核表达,将纯化的重组蛋白作为包被抗原建立了ADV的Dot-ELISA检测方法,并与对流免疫电泳(C...
关键词：水貂阿留申病毒 VP2基因 原核表达 DOT-ELISA检测 
水貂阿留申病毒5个分离株的全基因测序及遗传变异分析被引量：1
《动物医学进展》2015年第8期35-39,共5页刘东旭 李健明 时坤 曾范利 刘菲 杜锐 
国家自然科学基金项目(31272565)
流行病学调查表明,水貂阿留申病是严重危害水貂养殖业的3大疫病之首。迄今为止,尚未开发出能有效防控水貂阿留申病的疫苗。本试验根据GenBank上公布的不同水貂阿留申病毒(ADV)毒株的基因序列,设计并合成了12对引物,对吉林农业大学经济...
关键词：水貂阿留申病毒 分离株 全基因 遗传变异 
水貂阿留申病病毒VP2截短基因的原核表达
《动物医学进展》2015年第4期15-18,共4页李晶 时坤 曾范利 宋继伟 杜锐 
国家自然科学基金项目(31272565);吉林省经济动物疾病防治创新项目(20130521023JH)
为获得水貂阿留申病病毒G株(ADV-G株)VP2截短基因表达的蛋白,将ADV-G株VP2基因的主要抗原区片段克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,通过不同浓度的IPTG,不同诱导时间以及加入不同的化学分子伴侣(甘油、葡萄糖、蔗糖、二甲基亚砜、乙醇)进...
关键词：水貂阿留申病病毒 VP2截短基因 原核表达 
水貂阿留申病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：8
《中国畜牧兽医》2014年第9期1-5,共5页张秀丽 于慧娟 徐超 张桉潮 宋兴超 郝俊伟 赵家平 杜锐 
国家自然科学基金(31272565)
根据水貂阿留申病毒(Aleutian mink disease virus,AMDV)基因序列(GenBank登录号:NC_001662.1)设计1对特异性引物,通过对荧光定量PCR反应条件的优化,建立了检测AMDV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,该方法的灵敏度达10拷贝/μL,≥102拷贝...
关键词：水貂阿留申病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR 标准曲线 
牛病毒性腹泻-黏膜病病毒E_2基因重组卡介苗的构建
《中国兽医杂志》2014年第7期32-35,共4页时坤 王文玉 王慧慧 曾范利 李健明 杜锐 
国家科技支撑计划(2011BAI03B02-1);国家自然科学基金(31272565);吉林省科技厅科技支撑计划(20120225);吉林农业大学博士启动基金(201209)
本试验将成功克隆的牛病毒性腹泻-黏膜病病毒Changchun184株E2基因与大肠杆菌-分枝杆菌整合表达载体pMV361连接,构建重组整合质粒pMV361-E2。并确定了电转化的最佳条件:2.0 kV/cm、25μF、1 000Ω,成功获得了E2基因重组卡介苗。在45℃...
关键词：牛病毒性腹泻-黏膜病病毒 E2基因 重组卡介苗 构建 
水貂阿留申病毒NS1基因在大肠杆菌中的分段表达
《中国畜牧兽医》2014年第4期32-36,共5页刘红娜 王文玉 张云 杨宇航 郝俊伟 时坤 李健明 杜锐 
国家自然科学基金(31272565)
利用DNAStar Protean模块预测分析水貂阿留申病毒(aleutian disease virus,ADV)NS1基因后,设计3对特异性引物,以吉林农业大学经济动物实验室保存的NS1全长克隆质粒NS1-pMD18-T为模板扩增NS1基因的3个截短片段,分别命名为L1 N1、L2 N2、L...
关键词：水貂阿留申病毒NS1基因 大肠杆菌 分段表达 
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