酒酒球菌mleA基因重组表达质粒pYELmleA的构建及其在酿酒酵母中的表达  

Construction of Recombinant Expression Plasmid pYELmleA of mleA Gene and Expression in Saccharomyces cerevisiae

作　　者：刘延琳 [1] 蒋思欣 [2] 何秀萍 [2] 李华 [1] 张博润 [2] 

机构地区：[1]西北农林科技大学葡萄酒学院,陕西,杨凌,712100 [2]中国科学院微生物研究所,北京,100080

出　　处：《中国农学通报》2005年第4期48-52,共5页Chinese Agricultural Science Bulletin

基　　金：陕西省自然科学基金，西北农林科技大学校科研和教改项目

摘　　要：苹果酸-乳酸酶是进行MLF的功能酶.笔者进行酒酒球菌SD-2a的苹果酸-乳酸酶基因重组表达质粒的构建,利用来自重组质粒pLmleA的mleA基因,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,以大肠杆菌-酵母菌穿梭质粒YEp352为载体,构建了重组表达质粒pYELmleA,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58.酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定.SDS-PAGE检测表明获得的转化子表达了约60KD的目标蛋白,斑点杂交检测表明目的基因mleA转化到受体菌中.获得的转化子在添加了L-苹果酸的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测L-苹果酸及L-乳酸含量,采用t检验进行差异显著性分析,结果表明nleA基因进行了功能性的表达,将L-苹果酸转化成L-乳酸,L-苹果酸和L-乳酸含量分别与对照差异极显著和显著,L-乳酸的生成量为1002-1106mg/L,苹果酸的相对降低率为19.16-22.34%.

关 键 词：重组表达质粒 LEA基因 酿酒酵母 构建 球菌 L-苹果酸 乳酸含量 L-乳酸 显著性分析 转化子 重组质粒 调控元件 强启动子 穿梭质粒 大肠杆菌 筛选鉴定 PAGE 目的基因 杂交检测 HPLC MLF 酶基因 终止子 酵母菌 亮氨酸 色氨酸 

分 类 号：S631.201[农业科学—蔬菜学] Q78[农业科学—园艺学]