重组克隆

作品数：52被引量：124H指数：5
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人源RNA解旋酶DHX34基因功能结构域缺失载体的构建及鉴定
《山西医科大学学报》2025年第1期20-27,共8页黄立敏 张春丽 李泽雨 孙晋 田红卫 
国家自然科学基金资助项目(81802456);陕西省自然科学基金面上项目(2024JC-YBMS-691)。
目的 分别构建人源RNA解旋酶DHX34基因不同功能结构域缺失的突变载体,测序分析和验证其在293T细胞中的蛋白表达。方法 以pECMV-hDHX34-3×FLAG-SV40-Puro(hDHX34)质粒为模板,根据同源重组克隆的技术原理设计不同功能结构域引物,通过聚...
关键词：RNA解旋酶 DHX34基因 功能结构域缺失 载体构建 重组克隆 限制性内切酶 
基于转化相关重组克隆曲酸合成基因簇及其在黑曲霉中的异源整合表达
《微生物学通报》2024年第10期4028-4042,共15页赵宇欣 谭宇洋 高莹 朱柏松 张明怡 曹威 
国家重点研发计划(2021YFC2100700)。
【背景】黑曲霉(Aspergillus niger)是一种重要的丝状真菌底盘细胞,然而对其进行大片段DNA的遗传操作存在工具缺乏、效率低下的问题。海量基因组数据中存在大量未被鉴定的次级代谢产物合成基因簇,因相应DNA分子量大而难以克隆,大部分基...
关键词：转化相关重组克隆 大片段DNA 黑曲霉 曲酸合成基因簇 
CD133基因启动子的克隆与序列分析被引量：1
《中国实验诊断学》2017年第8期1428-1429,共2页王晓峰 张天夫 刘新 刘晓军 
吉林省教育厅"十三五"科学技术项目(JJKH20170822KJ);吉林省直卫生专项项目(sczsy201525)
近些年来,口腔颌面部恶性肿瘤的发病率逐年增加（[1]）。虽然目前针对恶性肿瘤的治疗手段有了很多新的进展,但仍有部分肿瘤患者不能治愈。自从肿瘤干细胞（CSCs）理论提出后,给肿瘤患者带来了新的曙光（[2]）。有研究表明,CD133是某些...
关键词：肿瘤干细胞 头颈部肿瘤 启动子 CD133 重组质粒 序列分析 特异性标记 感受态细菌 重组克隆 限制性内切酶 
单菌落PCR在发夹RNA重组克隆鉴定中的应用被引量：1
《湖北农业科学》2014年第1期220-221,235,共3页李旭艳 恽冬泽 邵淑丽 
黑龙江省自然科学基金项目(C200624);黑龙江省教育厅科学技术项目(11511447;12511611)
以单菌落为模板进行PCR扩增,直接筛选插有发夹RNA(Small hairpin RNA,shRNA)干扰片段的重组阳性克隆。以圆滑单菌落为PCR模板,采用载体通用引物直接扩增目的片段,质粒测序验证PCR结果的正确性。结果表明,在筛选的6个菌落中均扩增出324 b...
关键词：重组克隆 
牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7Mt合基因的克隆与生物信息学分析
《中国畜牧兽医文摘》2013年第12期82-82,共1页贾立军 
为了解牛源犬新孢子虫NcSRS2-NcGRA7融合基因的生物学特性，本试验提取牛源犬新孢子虫基因组DNA，应用PCR技术扩增犬新孢子虫表面蛋白基因NcSRS2和致密颗粒蛋白基因NcGRA7，SOE—PCR技术拼接NcSRS2和NcGRA7基因，构建NcSRS2-NcGRA7融合...
关键词：犬新孢子虫 融合基因 生物信息 重组克隆 学分 PCR技术 牛 基因组DNA 
不依赖连接反应的高通量克隆方法被引量：5
《氨基酸和生物资源》2013年第4期43-46,共4页李华琴 林陈水 张文倩 
基因表达及功能分析需要高通量的表达系统,因而简单、经济且高效地将PCR产物或其他来源的目的基因片段构建到质粒载体中就成为了亟需解决的问题。传统克隆方法使用限制性内切酶和连接酶,其缺点是受到基因序列中原有的酶切位点的限制以...
关键词：不依赖连接克隆 Gateway重组克隆 UDG克隆 
一种简单高效的酵母单菌落PCR方法被引量：7
《生物技术通讯》2013年第2期225-229,共5页陈忠翔 房志家 陈婷 赵敏 黄志伟 
国家自然科学基金(31100549);中央高校基本科研业务费专项资金(2011D10512);上海浦江基金(11PJ1400100)
目的:为快速简便地挑选出酿酒酵母重组克隆,探索建立一种经济、直接、高效的酵母单菌落PCR方法。方法:以Leu2MX6基因同源重组或重组质粒转化得到的酵母突变菌为材料,分别采用传统的提取基因组或质粒的方法、煮沸法及化学试剂处理法等制...
关键词：酵母 菌落PCR 重组克隆 筛选 
改良菌落PCR法筛选、鉴定DHBV部分核衣壳蛋白基因的重组克隆被引量：1
《中国病原生物学杂志》2012年第4期264-268,共5页王玉 于爱莲 姜世金 施鲁笛 陈国敏 高鹏 
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(博士基金)项目(No.2007BS02004);山东省科技发展计划项目(No.2010GNC10914);山东省高等学校科技计划项目(No.J08LF07)
目的优化并验证改良菌落PCR程序的有效性。方法经常规PCR扩增DHBV编码核衣壳蛋白与DNA多聚酶重叠区的部分核苷酸片段(DHBc-dp),纯化特异性扩增产物并连入pMD 18-T载体,转化DH5α感受态细胞后涂布于Amp加倍的LB平板,记为亲代样品(PS),37...
关键词：DHBV 核蛋白基因 菌落PCR 鉴定重组质粒 
一种快速简便高通量筛选重组克隆的方法被引量：1
《江苏农业科学》2012年第6期41-42,共2页董冰雪 李玉英 叶壮清 耿三春 李运会 宋雅菲 刘伟 
河南省科技攻关计划(编号:112102210385);南阳师范学院高层次人才科研启动费(编号:zx20110007)
介绍了一种极其简单、快速、廉价、可靠的从cDNA文库或者转化平板上高通量筛选重组质粒的方法。将细菌培养液或者转化平板上的单菌落直接用1%SDS一步裂解,琼脂糖凝胶快速电泳,根据DNA迁移速率判断是否重组质粒。裂解上清液可以稀释后直...
关键词：重组质粒 高通量筛选 一步裂解 DNA迁移速率 PCR 
基因转运载体中甲基化XbaⅠ位点的体外克隆与应用
《中国病原生物学杂志》2012年第1期17-21,共5页王玉 于爱莲 姜世金 郭慧君 赵英会 于广福 施鲁笛 
山东省优秀中青年科学家科研奖励基金(博士基金)项目(No.2007BS02004)
目的探讨基因转运载体中甲基化XbaⅠ位点在基因克隆中的效用。方法以pIRES2-EGFP为母本,PCR扩增获得携附加XhoⅠ位点和满足甲基化序列组成的XbaⅠ位点、同时缺失IRES和EGFP区段的载体骨架pΔSG,其PCR产物与携带对等酶切位点的EGFP PCR...
关键词：甲基化XbaⅠ 重组克隆 稳定性 生物活性 
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