定向克隆

作品数：50被引量：135H指数：7
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人源RAD9A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达
《湖北理工学院学报》2016年第6期56-60,共5页刘杰 陈怡香 岳虎 邱尧一 何衎 喻昕 
湖北理工学院大学生科技创新项目(项目编号:201510920019);湖北理工学院人才引进项目(项目编号:16xjz08R);湖北省教育厅科学技术研究计划青年人才项目(项目编号:000713)
构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9A基因真核细胞表达载体,转染至肾癌细胞786-0中,使EGFP-RAD9A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293T细胞c DNA中扩增RAD9A基因编码区,经双酶切后连接入表达载体p EGFP-N1多克隆位点,并对阳性重组子进行...
关键词：周期检测点蛋白RAD9A 定向克隆 真核细胞表达载体 肾癌 
T载体的应用及研究进展被引量：2
《科学技术与工程》2014年第30期102-108,118,共8页田生礼 梁秀怡 梁志成 
深圳市科创委基金项目(JC201005280549A)资助
T载体可直接用于克隆PCR产物,因此应用于大规模的基因克隆中,具有快速、高效、操作简单等优点。对T载体进行了综述,介绍了T载体在生物学众多领域的广泛应用,总结了当今T载体的技术创新和改良,特别介绍了目前最新的新型多功能T载体——...
关键词：T载体 TA克隆 定向克隆 表达型T载体 
狂犬病“靶向性”中和表位DNA疫苗的构建与瞬时表达被引量：1
《中国兽医学报》2013年第7期1021-1026,共6页肖跃强 谢金文 李书光 魏凤 丁壮 刘吉山 沈志强 
山东省青年自然科学基金资助项目(Q2008D04)
采用RT-PCR获得BALB/c小鼠P41基因,并在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;然后采用定向克隆方法将狂犬病病毒糖蛋白主要中和抗原表位核苷酸序列替换P41序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应以获得带有Koza...
关键词：狂犬病病毒中和表位 BALB c小鼠恒定链 定点突变 定向克隆 瞬时表达 
疏水性ELP基因设计与基因库构建被引量：4
《微生物学通报》2013年第4期584-592,共9页林衡 李军明 张立超 葛高顺 许崇波 胡学军 
国家自然科学基金项目(No.31070822);辽宁省教育厅高校科研计划项目(No.L2010015)
【目的】设计合成疏水性类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)基因,建立ELP基因库。【方法】选择疏水性最强的异亮氨酸(Ile,I)(疏水参数:4.5)取代ELP五肽重复序列单元(缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-客座氨基酸-甘氨酸,VPGXG)中客座残基X...
关键词：类弹性蛋白 异亮氨酸 同尾酶 定向克隆 
狂犬病“靶向性”Th表位DNA疫苗的构建与瞬时表达研究被引量：2
《中国兽医科学》2012年第2期176-181,共6页肖跃强 管宇 谢金文 郭广君 魏风 刘吉山 沈志强 
山东省青年自然科学基金项目(Q2008D04)
用RT-PCR扩增BALB/c小鼠P31基因,在不影响氨基酸序列前提下,对序列中461nt NcoⅠ酶切位点进行定点突变;采用定向克隆方法将狂犬病病毒核蛋白、糖蛋白及NS蛋白主要Th抗原表位核苷酸序列替换P31序列中CLIP区域,进行新一轮PCR反应获得带有K...
关键词：狂犬病病毒Th表位 BALB/c小鼠恒定链 定点突变 定向克隆 瞬时表达 
人胃癌组织定向cDNA文库的构建
《中国临床新医学》2011年第5期394-397,共4页吴锟 谢玉波 王连振 肖强 
国家自然科学基金资助项目(编号:81060201);广西科学研究与技术开发计划项目(编号:桂科攻10124001A-22);中国博士后科学基金特别资助项目(编号:201003342)
目的快速构建成人胃癌组织cDNA文库。方法从人胃癌组织分离总RNA，以含有轴IB酶切位点的oligo（dT）引物合成第1链cDNA，以含蛳IA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD-PCR扩增双链cDNA，双链cDNA经sGI（IA＆IB）酶切，以CHROMA SPIN＋TE-...
关键词：CDNA文库 胃癌 定向克隆 
人EGFR显性负性突变体负调控内源性EGFR功能的机制分析被引量：4
《生命科学研究》2010年第3期203-207,239,共6页廖刚 王子卫 赵林 张能 董浦江 
国家自然科学基金资助项目(30972872)
通过定向克隆法构建真核表达载体pEGFPN1-DNEGFR,脂质体介导下转染体外培养的SGC-7901细胞,应用Western blotting检测DNEGFR-EGFP蛋白的表达,激光共聚焦显微镜对DNEGFR-EGFP亚细胞结构定位检测;并经RT-PCR、Western blotting检测DNEGFR-...
关键词：表皮生长因子受体(EGFR) 显性负性突变体 磷酸化水平 定向克隆 亚细胞结构定位 
结核CFP10/ESAT6抗原和人GM-CSF基因重组卡介苗的构建与免疫原性研究被引量：1
《中国病理生理杂志》2010年第A10期2030-2030,共1页杨晓玲 邓仪昊 夏志扬 黄丹丹 鲍朗 
国家传染病重大专项资助项目(No.2008ZX10003-013);国家自然科学基金资助项目(No.30872257)
关键词：免疫原性研究 CFP10/ESAT6 基因重组 免疫反应 血清特异性 重组穿梭质粒 重组质粒 融合基因 定向克隆 周达 
人EGFR显性负性突变体真核表达载体的构建、蛋白表达及亚细胞结构定位被引量：3
《第四军医大学学报》2009年第21期2266-2270,共5页廖刚 王子卫 赵林 张能 汤为学 
国家自然科学基金(30972872)
目的:构建人EGFR显性负性突变体真核表达载体pEGFPN1-DNEGFR,转染COS-7细胞,检测DNEGFR-EGFP的表达并进行亚细胞结构定位.方法:将RT-PCR(reverse tran-scription-polymerase chain reaction)方法扩增得到编码EGFR信号肽段、胞外区和跨...
关键词：表皮生长因子受体 显性负性突变体 单核苷酸多态性 定向克隆 亚细胞结构定位 
NF-κB决定小鼠胎肝激酶-1基因启动子的基本活性
《华中科技大学学报（医学版）》2008年第2期153-153,共1页郑丽端 童强松 杨渝珍 
关键词：胎肝激酶-1 基因启动子 NF-ΚB 启动子活性 小鼠 血管内皮细胞 定向克隆 liver 
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