国家科技支撑计划(2007BAI46B01)

作品数:11被引量:36H指数:3
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相关机构:军事医学科学院沈阳药科大学汕头大学更多>>
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甲基营养菌MP688胞外多糖合成的影响因素研究
《生物技术通讯》2013年第5期655-658,共4页葛欣 韩月梅 熊向华 汪建华 刘党生 张惟材 
国家自然科学基金(31100024);国家科技支撑计划(2007BAI46B01)
目的:考察培养基组分和发酵条件对甲基营养菌MP688合成胞外多糖的影响,确定最主要的影响因素。方法:将甲基营养菌MP688接种到基础培养基中,通过改变基础培养基的氮源、培养温度、初始pH值和培养时摇床转速等条件,检测在每种条件下...
关键词:甲基营养菌 胞外多糖 Plackett—Burman实验设计 
甲基营养菌MP688中启动子探针载体的构建被引量:2
《生物技术通讯》2012年第5期644-647,共4页杜宝华 葛欣 王文溪 熊向华 汪建华 何建勇 张惟材 
国家科技支撑计划(2007BAI46B01);国家高技术研究发展计划(2006AA020303)
目的:以半乳糖苷酶基因作为报告基因,构建适于探测甲基营养菌MP688启动子的载体。方法:通过PCR扩增半乳糖苷酶基因片段,连入质粒pCM66构建启动子活性探针载体pMPlacZ。根据MP688的基因组序列设计引物,通过PCR扩增5个pqqA基因、核糖体亚...
关键词:甲基营养菌 半乳糖苷酶 启动子活性检测载体 启动子活性测定 
山梨糖脱氢酶在脱氮副球菌中的表达被引量:2
《生物技术通讯》2012年第2期204-206,共3页朱斌 熊向华 汪建华 何建勇 张惟材 
国家自然科学基金(31100024);国家高技术研究发展计划(2006AA020303);国家科技支撑计划(2007BAI46B01)
目的:在脱氮副球菌PD1222中表达山梨糖脱氢酶(SDH)。方法:从质粒pMD-18T上复制氨苄西林抗性基因Ampr,从酮古龙酸菌中复制SDH基因sdh,先后酶切连接到pIND4质粒上,构建pIND4-Ampr-sdh穿梭质粒;再把pIND4-Ampr-sdh电转入大肠杆菌S17-1λpi...
关键词:山梨糖脱氢酶 脱氮副球菌 接合转移 酮古龙酸菌 
甲基营养菌MP688基因组完成图构建
《生物技术通讯》2011年第4期493-496,共4页智静娟 熊向华 何建勇 汪建华 何涛 张惟材 
国家科技支撑计划(2007BAI46B01);国家高技术研究发展计划(2006AA020303)
目的:在Solexa测序建立的甲基营养菌MP688基因组精细图的基础上,构建MP688基因组完成图。方法:根据MP688基因组序列设计引物,进行常规PCR扩增,填补Scaffold内部缺口;利用BLASTN、BLAT软件分析预测6个Scaffold定位关系;通过组合PCR、长距...
关键词:甲基营养菌 基因组完成图 物理缺口 
3种检测吡咯喹啉醌的方法比较被引量:18
《生物技术通讯》2011年第4期544-547,共4页杨延新 熊向华 游松 张惟材 
国家科技支撑计划(2007BAI46B01)
目的:研究和比较3种检测吡咯喹啉醌(PQQ)的方法,确定各种方法的特点和适用范围。方法:设计和改进了3种检测PQQ的方法,分别为活性电泳法、光谱法和NBT-Gly法,探讨其检测限和线性范围、精密度、样品检测和加样回收率。结果:活性电泳法专...
关键词:吡咯喹啉醌 检测方法 活性电泳法 光谱法 NBT-Gly法 
甲基营养菌MP681基因组测序文库的构建
《生物技术通讯》2010年第6期775-778,共4页杨璐 熊向华 汪建华 张惟材 
国家高技术研究发展计划(2006AA020303);国家科技支撑计划(2007BAI46B01)
目的:建立甲基营养菌MP681基因组文库,用于鸟枪法测序。方法:提取MP681基因组DNA,经超声随机片段化及T4 DNA聚合酶末端修平处理后,与经SmaⅠ酶切、小牛肠碱性磷酸酶(CIP)去磷酸化处理的pUC19载体连接,电击转化大肠杆菌DH5α感受态,并通...
关键词:甲基营养菌 基因组测序 鸟枪法 文库构建 吡咯喹啉醌 
甲基营养菌甲醇脱氢酶基因的克隆及表达被引量:4
《生物技术通讯》2010年第6期779-782,共4页李淼鑫 熊向华 汪建华 刘党生 张惟材 
国家高技术研究发展计划(2006AA020303);国家科技支撑计划(2007BAI46B01)
目的:从甲基营养菌MP681中扩增甲醇脱氢酶(MDH)基因,在大肠杆菌中表达并检测其活性,同时在MP681中考察该基因对吡咯喹啉醌(PQQ)产生的影响。方法:根据MP681基因组序列设计引物,PCR扩增靶基因mdh,构建表达载体,考察活性,利用接合转移转化...
关键词:甲基营养菌 甲醇脱氢酶 接合转移 吡咯喹啉醌 
山梨糖脱氢酶在乙酸钙不动杆菌中的表达被引量:3
《生物技术通讯》2010年第6期783-786,共4页熊向华 陈伟 汪建华 游松 张惟材 
国家高技术研究发展计划(2006AA020303);国家科技支撑计划(2007BAI46B01)
目的:在乙酸钙不动杆菌Y2004中表达山梨糖脱氢酶。方法:将酮古龙酸菌山梨糖脱氢酶基因sdh以及从pWH1266质粒上扩增的复制原点ori先后酶切连接到pBBR1MCS2质粒上,构建pBBR1MCS2-ori-sdh穿梭质粒;再以pBBR1MCS2-ori-sdh/DH5α为供体菌、...
关键词:山梨糖脱氢酶 乙酸钙不动杆菌 三亲本接合转移 普通酮古龙酸菌 
大肠杆菌pqqL基因敲除与功能分析被引量:3
《微生物学报》2010年第10期1380-1384,共5页熊向华 杨璐 韩晓东 汪建华 张惟材 
国家"863计划"(2006AA020303);国家科技支撑计划项目(2007BAI46B01)~~
【目的】通过构建大肠杆菌pqqL基因缺陷突变株,研究大肠杆菌pqqL基因的功能。【方法】首先通过PCR扩增得到pqqL基因和kan抗性基因,在体外构建线性打靶片段pqqL-kan-pqqL。然后通过Red同源重组敲除大肠杆菌的pqqL基因,构建大肠杆菌缺失...
关键词:吡咯喹啉醌 RED同源重组 基因敲除 
利用山梨糖脱氢酶活性筛选氧化葡糖杆菌PQQ合成基因簇被引量:1
《微生物学报》2010年第8期1104-1108,共5页高书颖 熊向华 汪建华 张惟材 
国家"863计划"(2006AA020303);国家科技支撑计划项目(2007BAI46B01)~~
【目的】利用山梨糖脱氢酶醌酶活性从氧化葡糖杆菌H24中分离PQQ生物合成基因簇。【方法】利用ptsG位点整合sdh基因的大肠杆菌JM109作为宿主菌构建了氧化葡糖杆菌H24的基因组DNA文库。通过山梨糖脱氢酶活性检测,从文库中筛选具有PQQ合成...
关键词:山梨糖脱氢酶 吡咯喹啉醌 氧化葡糖杆菌H24 基因簇 
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