国家自然科学基金(30200011)

作品数:17被引量:133H指数:7
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胸膜肺炎放线杆菌荧光抗体检测方法的建立
《中国预防兽医学报》2008年第12期949-953,共5页王贵平 刘军发 陈剑锋 何启盖 刘正飞 陈焕春 吴斌 周锐 
国家自然科学基金(30200011);湖北省科技攻关计划(2006AA202A05);国家生猪现代产业技术体系项目;湖北省2001年重点科技攻关(2001AA201B02)
将表达的胸膜肺炎放线杆菌(APP)外膜脂蛋白(OmlA)纯化后免疫新西兰白兔,收集高免血清作为一抗,建立了间接荧光抗体检测方法(IFA)。同时用提纯IgG标记FITC,作为荧光抗体,建立了直接荧光抗体检测方法(FA)。这2种检测方法对血清1型~12型AP...
关键词:胸膜肺炎放线杆菌 外膜脂蛋白 荧光抗体 
Cloning and Expression of Actinobacillus pleuropneumoniae Gene Coding for TbpA and Development of an Indirect TbpA-ELISA
《Agricultural Sciences in China》2008年第10期1267-1273,共7页LIANG Wang-wang HE Qi-gai CHEN Huan-chun XU Di-ping WU Rui ZHANG Rong-rong 
the National Key Technol- ogy R & D Program during the 11th Five-Year Plan period (2006BAD06A12, 2006BAD06A18);the National Natural Science Foundation of China (30200011)
This study presents the cloning and expression of gene encoding transferrin-binding protein A from Actinobacillus pleuropneurnoniae in Escherichia coli expression system and the development of an indirect TbpA-ELISA. ...
关键词:Actinobacillus pleuropneumoniae transferrin-binding protein DIAGNOSE 
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅲ A基因的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达
《中国兽医学报》2007年第6期830-833,共4页汪招雄 何启盖 刘军发 刘正飞 陈焕春 
国家自然科学基金资助项目(30200011);农业结构调整重大技术研究专项资助项目(04-10-01A)
应用PCR方法扩增猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinabacillus pleuropneumoniae,App)编码毒素A结构蛋白的完整基因,连接到载体pMD18-T中,经Not和Snab双酶切后连接到用同样酶切的表达载体pPIC9k上,转化GS115酵母感受态细胞,经甲醇诱导表达...
关键词:胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅢA基因 PICHIA PASTORIS 分泌表达 
猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型RTX毒素I的N-端表达多肽具有良好的免疫原性被引量:3
《生物工程学报》2006年第1期39-45,共7页梅岭 周锐 卢海松 贝为成 刘维红 林荔雯 洪文洲 陈焕春 
教育部新世纪优秀人才支持计划(NCET040740);国家自然科学基金(No.30200011)~~
ApxI外毒素是猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)最重要的毒力因子,为了研究其N端多肽的免疫原性,分别将apxIA基因的全长编码区(apxIA,3146bp)及其5′端1140bp的片段(apxIA5)克隆到原核表达载体pET28a,经IPTG诱导后在大肠杆菌中实现了表达,表达产...
关键词:猪胸膜肺炎放线杆菌 ApxI毒素 N-端多肽 原核表达 免疫原性 
猪胸膜肺炎放线杆菌荚膜多糖基因的原核表达及其产物的细胞毒性被引量:1
《中国兽医科技》2005年第10期761-765,共5页刘丽娜 何启盖 陈焕春 刘正飞 贝为成 
国家自然科学基金项目(30200011);湖北省科技攻关项目(2001AA201B02)
参考GenBank中猪胸膜肺炎放线杆菌(App)血清2型荚膜多糖基因的序列分别设计了3对特异性引物,通过PCR分别扩增了CpsA、CpsB、CpsC 3个基因,获得长约1 137、429、1 146 bp的片段,将其分别克隆到pMD 18-T中,经酶切鉴定和序列分析获得了阳...
关键词:猪胸膜肺炎放线杆菌 荚膜多糖基因 克隆 表达 细胞毒性试验 
猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡA基因的真核表达及其核酸疫苗被引量:9
《农业生物技术学报》2005年第5期616-619,共4页贝为成 严琳 何启盖 肖少波 陈焕春 
国家自然科学基金(No.30200011);湖北省科技攻关项目(No.2001AA201B02)基金资助
利用PCR从自行分离鉴定的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneuromoniae,APP)血清7型菌株基因组DNA中扩增apxⅡA基因,构建了一个利用人类巨细胞病毒(Human cytomegalo virus HCMV)启动子表达apxⅡA基因的真核表达质粒pCD...
关键词:猪传染性胸膜肺炎放线杆菌 apxⅡA基因 表达 核酸疫苗 免疫应答 
抗胸膜肺炎放线杆菌毒素Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的单克隆抗体的制备被引量:4
《农业生物技术学报》2005年第5期659-663,共5页黄红亮 李冲 周锐 谢甜甜 陈美玲 魏洁 洪文洲 陈焕春 
国家自然科学基金(No.30200011);中国博士后科学基金(No.20040350179)资助
分别用大肠杆菌(Escherichia coli)表达的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(A ctinobacillus pleuropneum oniae)外毒素(A px)Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ为抗原,免疫Balb/c小鼠,经细胞融合、克隆与筛选,分别获得能稳定分泌A pxⅠ、A pxⅡ和A pxⅢ单克隆抗体的...
关键词:胸膜肺炎放线杆菌 ApxⅠ ApxⅡ ApxⅢ 单克隆抗体 
猪胸膜肺炎放线杆菌毒素蛋白的表达、纯化及其间接ELISA检测方法的建立与应用被引量:5
《中国兽医学报》2005年第2期145-147,共3页梁望旺 何启盖 刘正飞 陈焕春 吴斌 徐晓娟 李涛 
国家自然科学基金资助项目(30200011);技攻关项目(2001AA201B02);湖北省自然科学基金资助项目
将含有猪胸膜肺炎放线杆菌毒素 基因的质粒 p ET- Apx 转化到大肠杆菌 BL2 1 (DE3)。挑选出表达量最高的克隆子 ,于 37℃经 IPTG诱导表达。对表达条件进行优化 ,并对包涵体进行了提纯和复性。用复性后的蛋白作抗原 ,建立了检测猪传染...
关键词: 胸膜肺炎放线杆菌 毒素 基因表达 基因纯化 间接ELISA 
猪传染性胸膜肺炎新型亚单位菌苗对小鼠的效力研究被引量:12
《畜牧兽医学报》2005年第2期177-180,共4页刘建杰 陈焕春 何启盖 吴斌 李冲 徐晓娟 陈汉阳 
国家自然科学基金(30200011);湖北省重点科技攻关项目(2001AA201B02)
利用大肠杆菌表达猪胸膜肺炎放线杆菌的分泌毒素ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ,提取表达产物包涵体,再加入我国流行的猪胸膜肺炎放线杆菌7型菌,和等量弗氏佐剂乳化后制成亚单位菌苗,免疫 BALB/c小鼠,间隔 2 周加强免疫1次。每次免疫后采血检测毒...
关键词:亚单位 小鼠 免疫后 菌苗 保护力 加强免疫 大肠杆菌表达 猪胸膜肺炎放线杆菌 猪传染性胸膜肺炎 菌株 
新型基因工程亚单位菌苗对猪传染性胸膜肺炎的保护效力研究被引量:12
《中国农业科学》2005年第3期596-600,共5页刘建杰 陈焕春 李冲 何启盖 吴斌 
国家自然科学基金资助项目(30200011);湖北省重点科技攻关项目资助(2001AA201B02)
利用分泌毒素 ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ的重组表达产物和胸膜肺炎放线杆菌 7 型菌,研制了一种新型的基因工程亚单位菌苗并对此疫苗的免疫效力进行了研究。利用该疫苗免疫断奶仔猪,间隔 3 周加强 1 次,同时设空白对照组和一种商品化的三价细...
关键词:猪传染性胸膜肺炎 菌苗 灭活苗 ELISA抗体 猪胸膜肺炎放线杆菌 断奶仔猪 亚单位 保护效力 细菌 气管 
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