广西壮族自治区科技攻关计划(0719004-3F)

作品数：7被引量：36H指数：3
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相关作者：熊毅徐贤坤刘棋龙剑明曾宪垠更多>>
相关机构：广西动物疫病预防控制中心广西大学四川农业大学柳州市动物疫病预防控制中心更多>>
相关期刊：《南方农业学报》《中国兽医科学》《动物医学进展》《农业生物技术学报》更多>>
相关主题：水牛Γ-干扰素皮内变态反应牛结核病原核表达更多>>
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γ-干扰素ELISA检测方法在广西牛结核病流行病学调查中的应用被引量：12
《南方农业学报》2013年第4期667-670,共4页徐贤坤 熊毅 韦达有 黄小武 蓝纪 黄胜斌 马琳 刘棋 
广西科技攻关项目(桂科攻0719004-3F)
【目的】摸清广西水牛及奶牛结核病的流行情况，为制定净化广西牛结核病防制策略提供参考。【方法】2008～2011年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法联合对广西奶牛及水牛开展结核病流行病学调查，共检疫5478头奶牛和1580头奶水...
关键词：牛结核病 γ-干扰素ELISA 皮内变态反应 流行病学调查 阳性率 广西 
双抗体夹心ELISA检测水牛γ-干扰素方法的建立及初步应用被引量：1
《畜牧与兽医》2012年第6期10-16,共7页徐贤坤 熊毅 刘棋 曾宪垠 龙剑明 
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0719004-3F)
纯化2株针对水牛γ-干扰素的单克隆抗体,其中1株进行HRP标记作为检测抗体,另1株单抗作为捕获抗体,建立检测水牛γ-干扰素的双抗体夹心ELISA(DAS-ELISA)。通过对封闭液、抗体稀释液等条件进行优化,经过方阵滴定试验确定捕获抗体的最佳浓...
关键词：结核病 IFNγ- ELISA ESAT-6/CFP-10 单克隆抗体 
水牛γ-干扰素单克隆抗体的制备及其特性分析被引量：2
《农业生物技术学报》2010年第3期610-615,共6页徐贤坤 熊毅 刘棋 曾宪垠 龙剑明 
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0719004-3F)资助
将原核表达的重组水牛(Bubalus bubalis)γ-干扰素成熟蛋白(rGST-WBIFN-γ)以100μg/只剂量免疫8周龄Balb/c小鼠(Mus musculus),经5次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,以rHIS-WB-IFN-γ和rGST-WBIFN-γ蛋白共同作为检测抗原...
关键词：Γ-干扰素 水牛 单克隆抗体 
两种奶牛结核病检测方法的比较被引量：15
《畜牧与兽医》2010年第2期29-33,共5页徐贤坤 黄小武 蓝纪 黄胜斌 熊毅 刘棋 韦正吉 黄益泓 
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0719004-3F);国家农业公益性行业科研专项经费资助(200803026);广西科技创新能力建设项目(08-05-01D)
本研究中采用常规皮内变态反应(TST)对广西南宁、柳州共计2 818头黑白花奶牛进行牛结核病检测,采用抗原特异性IFN-γ试验方法对PPD检测结果为阳性、可疑的牛以及部分阴性牛进行复检。将抗原特异性IFN-γ试验与TST检测结果相比,其敏感性...
关键词：奶牛结核病 皮内变态反应 抗原特异性IFN-γ试验 
牛结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白的原核表达及其在牛结核病检测中的应用被引量：8
《中国兽医科学》2009年第9期796-802,共7页徐贤坤 熊毅 龙剑明 刘棋 曾宪垠 
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0719004-3F);国家农业公益性行业科研专项(200803026);广西科技创新能力建设项目(08D5-01D)
采用重组PCR技术从牛结核分枝杆菌AN5基因组DNA中扩增CFP10-ESAT6融合基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32a,构建了原核表达质粒pET-CFP10/ESAT6。重组子经酶切及测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后经SDS-PAGE电泳鉴定...
关键词：牛结核病 融合蛋白 CFP-10 ESAT-6 
水牛IFN-γ成熟蛋白基因的原核表达及其产物多克隆抗体的制备被引量：2
《中国兽医科学》2008年第11期1003-1008,共6页徐贤坤 熊毅 龙剑明 刘棋 曾宪垠 
广西科技厅科技攻关项目(桂科攻0719004-3F)
将水牛γ-干扰素成熟蛋白(IFN-γ)基因亚克隆至pGEX-6P-1中,成功构建了pGEX-BoIFN-γ表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)重组菌进行IPTG诱导表达。应用SDS-PAGE方法对表达产物rGST-BoIFN-γ进行分析,用GST琼脂糖凝胶柱对可溶性蛋白进行...
关键词：γ-干扰素成熟蛋白基因 大肠杆菌表达系统 水牛 多克隆抗体 BALB/C小鼠 
广西水牛γ干扰素基因的克隆与序列分析被引量：2
《动物医学进展》2007年第9期19-23,共5页熊毅 朱伟 徐贤坤 龙剑明 刘棋 
广西科技厅科技攻关项目(0719004-3F)
提取经刀豆素(ConA)诱导培养的水牛外周血淋巴细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增水牛IFN-γ基因,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行测序。序列分析结果表明,获得的IFN-γ基因全长为544个碱基,其开放阅读框(ORF)为501个碱基,编码166个氨基酸...
关键词：Γ干扰素 克隆 序列分析 水牛 
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