易错PCR

作品数：113被引量：249H指数：8
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定向进化Rho1提高酿酒酵母的乙醇耐受性和超高浓度乙醇发酵性能
《微生物学杂志》2023年第2期10-20,共11页谭慧萍 王惠国 赵增彤 程杨好 刘晨光 王亮 李倩 
国家自然科学基金计划项目(31500040);微生物代谢国家重点实验室开放课题项目(MMLKF20-09);辽宁省教育厅科研项目(J2020099);大连市青年科技之星项目(2019RQ104)。
燃料乙醇发酵过程中酿酒酵母细胞活性被高浓度乙醇严重抑制而导致发酵提前终止,生产强度严重降低,因此构建同时具有高耐受性、高发酵性能的菌株一直是发酵工业追求的目标。选取酿酒酵母细胞形态调节关键基因小GTP酶家族成员Rho1,构建易...
关键词：酿酒酵母 乙醇胁迫 Rho GTP酶 易错PCR 超高浓度乙醇发酵 
定向进化肌醇加氧酶MIOX4提高葡萄糖二酸的产量
《食品与发酵工业》2022年第22期1-8,共8页苏蕊芳 李诗韵 毛银 赵运英 邓禹 
国家重点研发计划项目(2019YFA0905502);国家自然科学基金(21877053)。
葡萄糖二酸是一种在医药、食品、服装纺织和化工均有重要作用的有机二元酸。葡萄糖二酸的生物合成途径已经在大肠杆菌、毕赤酵母和酿酒酵母细胞中成功构建。为了提高葡萄糖二酸合成关键酶-肌醇加氧酶MIOX4的活性,该研究以酿酒酵母(Sacch...
关键词：酿酒酵母 肌醇加氧酶MIOX4 葡萄糖二酸 易错PCR 生物传感器 
基因突变提高毕赤酵母表达内切β-1,3-葡聚糖酶活性
《食品与生物技术学报》2021年第2期57-64,共8页金树霞 王力 朱莉 李菲菲 刘丽萍 詹晓北 郑志永 高敏杰 
国家自然科学基金项目(31301408);江南大学自主科研计划重点项目(JUSRP51632A);江苏省重点研发计划(现代农业)项目(BE2018367)。
为构建一株高效表达内切β-1,3-葡聚糖酶的毕赤酵母菌株,并用于水解热凝胶生产β-1,3-葡寡糖。作者首先对哈茨木霉来源内切β-1,3-葡聚糖酶基因进行随机突变,并构建BGN13.1a突变库;然后采用高通量技术及刚果红平板筛选高表达菌株;最后采...
关键词：内切β-1 3-葡聚糖酶 毕赤酵母 易错PCR 酶学性质 
耐热植酸酶突变体的筛选及性质研究被引量：4
《中国生物工程杂志》2021年第2期30-37,共8页陈中伟 郑璞 陈鹏 程吴丹 
江苏省自然科学基金(BK20171261)资助项目。
目的:对大肠杆菌Escherichia coli植酸酶基因进行定向进化,获得热稳定性提高的植酸酶突变体。方法:利用易错PCR技术和96微孔板高通量筛选方法获得突变体基因,并对突变酶进行异源表达、纯化及性质研究。结果:通过筛选获得3株热稳定性明...
关键词：植酸酶 易错PCR 热稳定性 毕赤酵母 
利用易错PCR构建酱油酿造用T酵母spt15突变库被引量：2
《食品科学》2018年第14期106-111,共6页赵秀丽 张毓秀 孙月芹 侯丽华 
国家自然科学基金面上项目(31371819);天津市科技支撑重点项目(17YFZCNC00460);天津科技大学新农村发展研究院开放基金资助项目(xnc201604);天津市高等学校创新团队培养计划资助项目(TD13-5013)
为得到酱油酿造优良性状的微生物,对酱油酿造用T酵母进行研究。首先利用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术构建spt15(可编码TATA结合蛋白)的突变基因库,然后重组于表达载体YEplac195中,并导入尿嘧啶营养缺陷型菌株...
关键词：易错PCR spt15 基因突变库 筛菌 酱油发酵 
基于易错PCR技术的红酵母D-氨基酸氧化酶的定向进化被引量：1
《工业微生物》2014年第4期52-58,共7页孙晨 肖慈英 郭美锦 储炬 张嗣良 
采用易错PCR技术对来源于红酵母Rhodotorula gracilis的D-氨基酸氧化酶基因(RgDAAO)进行突变,构建并优化了突变株文库;结合48深孔板的高通量筛选方法,获得突变株M3217,其V_(max)相对于野生型提高了16.8%。对测序结果进行分析,发现突变...
关键词：易错PCR 定向进化 高通量筛选 红酵母D-氨基酸氧化酶 
优化易错PCR条件以提高毕赤酵母GAP启动子文库突变效率被引量：2
《生物技术通报》2014年第6期211-217,共7页秦秀林 钱江潮 储炬 
广西自然科学基金项目(2013GXNSFBA019096)
高效的随机突变策略对于构建含有丰富突变体的启动子文库至关重要。为了建立一个突变率适中并能获得较多有益突变子的易错PCR(error-prone PCR,EP-PCR)条件,实现毕赤酵母GAP启动子的高效突变,对EP-PCR反应条件进行了优化。考察了模板浓...
关键词：易错PCR 突变效率 随机突变 毕赤酵母 GAP启动子 
易错PCR提高华根霉脂肪酶的热稳定性被引量：1
《生物工程学报》2013年第12期1753-1764,共12页王睿 喻晓蔚 徐岩 
国家高科技研究发展计划(973计划)(No.2011CB710800);国家高技术研究发展计划(863计划)(Nos.2012AA022207;2011AA02A209;2011AA02A210);中央高校基本科研业务费专项资金(No.JUSRP11014);国家自然科学基金(No.20802027)资助~~
为了提高华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶的热稳定性,运用定向进化-易错PCR的方法,经两轮易错PCR引入突变,利用fast-blue RR顶层琼脂法对突变文库进行筛选,第一轮易错PCR后筛选到2株突变菌株,第二轮筛选到4株突变株。第...
关键词：定向进化 易错PCR 华根霉脂肪酶 热稳定性 毕赤酵母 
全局转录工程法构建产S-腺苷蛋氨酸重组酿酒酵母的研究被引量：5
《药物生物技术》2012年第5期386-391,共6页曹喜涛 陈凯 李扬 窦洁 王慧 周长林 奚涛 
江苏省自然科学基金(No.SBK200921231);江苏省教育厅高校产业化促进项目(No.JH10-12);江苏省青蓝工程(2008)资助
利用全局转录工程(global transcription machinery engineering,gTME)方法对酿酒酵母RNA聚合酶II中的转录因子SPT15和TAF25编码的基因进行克隆并结合易错PCR随机突变,将SPT15和TAF25的易错PCR产物连接改造的pYES2.0表达载体。并用醋酸...
关键词：酿酒酵母 全转录工程(gTME) SPT15 TAF25 易错PCR S-腺苷甲硫氨酸 
利用SPT3的定向进化提高工业酿酒酵母乙醇耐受性被引量：15
《生物工程学报》2010年第2期159-164,共6页赵心清 姜如娇 李宁 杨晴 白凤武 
国家自然科学基金项目(No.30500011);国家高科技研究发展计划(863计划)(No.2007AA10Z358)资助~~
利用对转录因子的定向进化可对多基因控制的性状进行有效的代谢工程改造。本研究对酿酒酵母负责胁迫相关基因转录的SAGA复合体成分SPT3编码基因进行易错PCR随机突变,并研究了SPT3的定向进化对酿酒酵母乙醇耐性的影响。将SPT3的易错PCR...
关键词：定向进化 乙醇耐性 SPT3 酿酒酵母 易错PCR 
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