易错PCR

作品数：113被引量：249H指数：8
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定向进化Rho1提高酿酒酵母的乙醇耐受性和超高浓度乙醇发酵性能
《微生物学杂志》2023年第2期10-20,共11页谭慧萍 王惠国 赵增彤 程杨好 刘晨光 王亮 李倩 
国家自然科学基金计划项目(31500040);微生物代谢国家重点实验室开放课题项目(MMLKF20-09);辽宁省教育厅科研项目(J2020099);大连市青年科技之星项目(2019RQ104)。
燃料乙醇发酵过程中酿酒酵母细胞活性被高浓度乙醇严重抑制而导致发酵提前终止,生产强度严重降低,因此构建同时具有高耐受性、高发酵性能的菌株一直是发酵工业追求的目标。选取酿酒酵母细胞形态调节关键基因小GTP酶家族成员Rho1,构建易...
关键词：酿酒酵母 乙醇胁迫 Rho GTP酶 易错PCR 超高浓度乙醇发酵 
大肠杆菌氨基转移酶的非天然氨基酸底物特异性研究
《湖北大学学报（自然科学版）》2021年第4期377-384,470,共9页何婷 倪雪晨 张萍萍 陈茹 宋晶晶 雷佳 王行国 
武汉市科技局对外科技合作与交流项目(200970634271)资助。
氨基转移酶催化L-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移.TLC(薄层层析)和甲臜颜色反应检测大肠杆菌4种氨基转移酶(TyrAT、IlvAT、AspAT和AvtAT)催化6种非天然氨基酸的转氨活性,发现AvtAT和AspAT无非天然氨基酸转氨活性.TyrAT能催化DL-高苯丙...
关键词：氨基转移酶 非天然氨基酸 易错PCR 底物特异性 最适温度 
通过易错PCR提高鼠伤寒沙门氏菌丙氨酸消旋酶催化活性被引量：2
《微生物学报》2020年第11期2475-2486,共12页郑豆豆 罗素亚 杜穆花 何广正 徐书景 鞠建松 
国家自然科学基金(31971204);河北师范大学科研基金(L2017K07,L2019B30);河北师范大学研究生创新资助项目。
【目的】通过易错PCR技术提高鼠伤寒沙门氏菌中丙氨酸消旋酶的催化活性。【方法】利用易错PCR技术构建丙氨酸消旋酶基因alrSt的突变体文库,采用缺陷菌株UT5028筛选突变体基因,以D-氨基酸氧化酶偶联法检测各突变蛋白的活性,通过凝胶过滤...
关键词：鼠伤寒沙门氏菌 丙氨酸消旋酶 易错PCR 低聚化 催化活性 
基于体外分子进化技术提高弯曲芽孢杆菌CCTCC 2015368 β-淀粉酶的热稳定性被引量：2
《生物工程学报》2018年第2期255-263,共9页陈磊 陈晟 吴敬 吴丹 
国家自然科学基金(No.31571776);国家杰出青年基金(No.31425020);江苏高校优秀科技创新团队项目;111计划(No.111-2-06);中央高校基本科研业务费专项资金(No.JUSRP51706A)资助~~
运用体外分子进化技术易错PCR方法,高通量筛选热稳定性提高的弯曲芽孢杆菌Bacillus flexus CCTCC2015368β-淀粉酶突变体。利用LB琼脂淀粉板显色、96-孔板DNS法测酶活和酶标仪检测等,最终筛选到了一株热稳定性显著提高的突变体D476N。...
关键词：分子进化 易错PCR Β-淀粉酶 热稳定性 
枯草芽孢杆菌β-糖苷酶的克隆表达、体外定向进化及结构模拟被引量：1
《微生物学报》2015年第10期1273-1283,共11页刘震 陈倩 陈荫楠 王祖鑫 朱秋享 石贤爱 
国家海洋公益性行业科研专项子课题(201205022-3);福建省科技重大专项(2013NZ0003)~~
【目的】从枯草芽孢杆菌基因组DNA中扩增出bgl C基因并在大肠杆菌中表达,分析表达产物的酶学性质并进行结构模拟,为进一步研究其生理功能及结构解析奠定基础。【方法】将bgl C基因克隆到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中表达,通...
关键词：异源表达 易错PCR 底物特异性 CD光谱 寡聚体 结构建模 
易错PCR法提高土芽孢杆菌ZH1羧酸酯酶的热稳定性被引量：3
《微生物学报》2015年第8期1060-1067,共8页刘韩 吴丽云 高贺 倪辉 蔡慧农 朱艳冰 
国家自然科学基金项目(31401632);集美大学科研创新团队基金项目(2010A006)~~
【目的】对土芽孢杆菌(Geobacillus sp.)ZH1的羧酸酯酶基因进行定向进化,筛选得到酶热稳定性提高的突变酶。【方法】利用易错PCR技术向羧酸酯酶基因中随机引入突变,建立酶基因突变文库,筛选获得热稳定性提高的突变体,并对突变酶进行诱...
关键词：定向进化 易错PCR 羧酸酯酶 热稳定性 
产耐热木聚糖酶细菌的分离鉴定及酶易错PCR致突变条件优化被引量：1
《微生物学杂志》2013年第6期6-12,共7页赵超 张宁宁 梅凡 艾超 阮灵伟 黄一帆 刘斌 
国家自然科学基金(41306181;31370146);中国博士后科学基金(2013M530303);福建省教育厅科技项目(JB12055);三亚市院地科技合作项目(2013YD76);国家海洋局海洋生物遗传重点实验室开放研究基金(HY201301);福建农林大学青年教师科研基金重点项目(2012XJJ03)
从福建省永泰县温泉采集样品中筛选到1株产耐热木聚糖酶嗜热菌株TC-W7,并获得该木聚糖酶基因。在此基础上,采用易错PCR技术在木聚糖酶基因中引入突变,研究Mg2+浓度、Mn2+浓度、dTTP/dCTP浓度等条件对突变率的影响。通过形态特征、生理...
关键词：耐热木聚糖酶 土壤芽胞杆菌 分离鉴定 
基于易错PCR技术定向进化枯草芽孢杆菌β-葡聚糖酶被引量：3
《生物技术通报》2013年第12期141-145,共5页邵敏 李长福 葛正龙 周鹤峰 
贵州省科技厅基金项目(黔科合J字LKZ[2010]42号)
利用易错PCR技术对来自枯草芽孢杆菌的β-葡聚糖酶基因(bgls)进行改造,并对野生酶和突变酶的酶学性质进行研究。以枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,通过易错PCR技术得到突变基因产物,将其重组于表达载体pET32a(+),构建β-葡聚糖酶基因的突...
关键词：枯草芽孢杆菌 Β-葡聚糖酶 易错PCR 定向进化 
基于sigma因子全局代谢扰动提高克雷伯肺炎杆菌的3-羟基丙酸产量被引量：1
《北京化工大学学报（自然科学版）》2012年第4期72-76,共5页王康 葛喜珍 田平芳 
国家自然科学基金(20876009)
利用易错PCR技术构建了全局转录机器工程(gTME)关键元件σ因子(rpoD基因)的突变文库,连接至表达载体,电转化K.pneumoniae DSM 2026,并且从大量阳性克隆中筛选出一株3-羟基丙酸(3-HP)高产菌。初步发酵试验表明,该携带突变rpoD基因的工程...
关键词：克雷伯肺炎杆菌 Σ因子 全局转录机器工程 易错PCR 3-羟基丙酸 
短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的随机突变被引量：2
《应用与环境生物学报》2010年第1期96-99,共4页杨锦 冯红 万民远 焦惠科 张晓露 张义正 
国家高技术研究发展计划(No.2006AA02Z221)资助~~
碱性蛋白酶(DHAP)属于丝氨酸蛋白酶家族(S8A),是由275个氨基酸残基组成的单链多肽,没有二硫键,以Asp32、His64、Ser221作为活性中心.采用易错PCR方法,对短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因(GenBank登录号:AY458140)进行随机突变.在大肠杆菌中...
关键词：碱性蛋白酶 短小芽孢杆菌 定向进化 易错PCR 序列分析 基因表达 
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