易错PCR

作品数：113被引量：249H指数：8
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分子改造羰基还原酶CpCR提高其催化合成2-苯乙醇能力
《食品与发酵工业》2023年第19期30-37,共8页陈孟军 吕育财 龚大春 郭金玲 
国家自然基金项目(21776162);湖北省技术创新专项(2019ABA114)。
该研究对近平滑假丝酵母ATCC 7330羰基还原酶CpCR进行分子改造,以提高其催化合成2-苯乙醇的能力。通过易错PCR构建突变文库,利用2,4-二硝基苯肼高通量筛选阳性突变株,测序确定氨基酸突变位点。再通过蛋白质半理性设计进行虚拟饱和突变,...
关键词：羰基还原酶 易错PCR 2 4-二硝基苯肼 半理性设计 2-苯乙醇 
定向进化肌醇加氧酶MIOX4提高葡萄糖二酸的产量
《食品与发酵工业》2022年第22期1-8,共8页苏蕊芳 李诗韵 毛银 赵运英 邓禹 
国家重点研发计划项目(2019YFA0905502);国家自然科学基金(21877053)。
葡萄糖二酸是一种在医药、食品、服装纺织和化工均有重要作用的有机二元酸。葡萄糖二酸的生物合成途径已经在大肠杆菌、毕赤酵母和酿酒酵母细胞中成功构建。为了提高葡萄糖二酸合成关键酶-肌醇加氧酶MIOX4的活性,该研究以酿酒酵母(Sacch...
关键词：酿酒酵母 肌醇加氧酶MIOX4 葡萄糖二酸 易错PCR 生物传感器 
氨糖合酶的定向改造及其在氨糖生物合成中的应用被引量：1
《基因组学与应用生物学》2018年第4期1511-1518,共8页杨彪 龚劲松 丁振中 李恒 窦文芳 许正宏 史劲松 
江苏省产学研合作前瞻性联合研究项目(BY2016022-19);江苏省科技成果转化专项(BA2015006)共同资助
本研究采用基因工程手段克隆表达和定向改造氨糖合酶GLS,并通过共表达氨糖乙酰化酶GNAL进一步增强宿主菌氨糖产生能力。首先通过不同表达质粒和宿主的优化筛选出最优GLS表达体系,成功构建获得E.coli Rosetta-gami（DE3）-p ET-24a-GLS...
关键词：氨糖 乙酰氨糖 氨糖合酶 易错PCR 重组表达 
大肠杆菌中顺式-3-羟脯氨酸羟化酶的定向改造被引量：1
《食品与发酵工业》2017年第1期7-11,共5页黄建华 王晓姣 魏照辉 张震宇 孙付保 
国家自然科学基金(30970058);国家自然科学基金(21176106);江苏省自然科学基金(BK2012554)
对以L-脯氨酸为底物,产顺式-3-羟脯氨酸(cis-3-hydroxyproline,H3P)的羟化酶基因进行定向改造。从重组菌E.coli BL21(DE3)/p ET21a-ptrp2-H3P出发,通过易错PCR随机突变和定点突变处理,利用多孔板和创建的简易显色法相结合的高通量方法...
关键词：重组大肠杆菌 易错PCR 顺式-3-羟脯氨酸(cis-3-hydroxyproline H3P) 脯氨酸-3-羟化酶 定向改造 
枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipaseA突变文库构建及其生物柴油转酯研究被引量：2
《浙江农业学报》2016年第5期864-869,共6页李璟 童晋 罗明银 黎宸位 鲜洁 
四川省教育厅科研项目(SZS013)
采用易错PCR方法对枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipase A进行定向进化,并首次采用对硝基苯棕榈酸酯(p NPP)法进行96孔板高通量筛选。结果表明:第一轮易错PCR没有产生随机突变,第二轮易错PCR反应在Mn^(2+)浓度为0.2 mmol·L^(-1)时,产生了突...
关键词：枯草芽孢杆菌 脂肪酶 易错PCR 对硝基苯棕榈酸酯 转酯效率 
基于易错PCR技术的红酵母D-氨基酸氧化酶的定向进化被引量：1
《工业微生物》2014年第4期52-58,共7页孙晨 肖慈英 郭美锦 储炬 张嗣良 
采用易错PCR技术对来源于红酵母Rhodotorula gracilis的D-氨基酸氧化酶基因(RgDAAO)进行突变,构建并优化了突变株文库;结合48深孔板的高通量筛选方法,获得突变株M3217,其V_(max)相对于野生型提高了16.8%。对测序结果进行分析,发现突变...
关键词：易错PCR 定向进化 高通量筛选 红酵母D-氨基酸氧化酶 
随机突变提高单胺氧化酶活性被引量：1
《生物工程学报》2014年第1期109-118,共10页陈雪君 马元慧 邵建华 赖敦岳 王志国 陈振明 
国家自然科学基金(No.31100584)资助~~
前期获得了一个对底物美西律具有一定活性的单胺氧化酶突变体A-1(F210V/L213C)。为进一步提高其酶活性,利用MegaWHOP PCR构建了库容约为104的随机突变库。筛选后获得了一个最优突变酶ep-1,比活力为A-1的189%。选择性测定结果表明,酶的...
关键词：单胺氧化酶 易错PCR 酶活力 分子动力学模拟 
易错PCR技术改造扩展青霉脂肪酶被引量：1
《食品与发酵工业》2011年第12期25-28,共4页施碧红 李强 陈明 吴伟斌 施巧琴 吴松刚 
福建省自然科学基金资助项目(No.B0610027)
利用易错PCR技术,建立脂肪酶基因随机突变文库,将随机突变脂肪酶基因转化毕赤酵母GS115,初步筛选了4000株突变菌株,对300株较优突变株进行酶的活力、耐热性、耐酸性的摇管复筛,进一步摇瓶复筛后获得优良突变株ep3,所产突变脂肪酶(ep3-GS...
关键词：易错PCR 改造 扩展青霉 脂肪酶 
毛霉△^6-脂肪酸脱氢酶随机突变文库的构建与分析被引量：1
《微生物学通报》2011年第5期694-701,共8页宋芬芬 江贤章 陈清霞 黄建忠 
国家自然科学基金项目(No.30970047;30370028);福建省自然科学基金重大项目(No.2003F005);福建省自然科学基金项目(No.2008F3036);福建省教育厅资助项目(No.JB09035)
毛霉Mucor sp.EIM-10△6-脂肪酸脱氢酶是γ-亚麻酸合成途径的关键酶。为提高脂肪酸脱氢酶的活性以及研究该酶一级结构对酶活性的影响,利用易错PCR对毛霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(mcd6)进行随机突变,将PCR产物与大肠杆菌-酿酒酵母穿梭表达载...
关键词：△6-脱氢酶 易错PCR 随机突变 毛霉 Γ-亚麻酸 
蛋白质分子进化技术研究进展被引量：1
《四川食品与发酵》2002年第1期21-25,共5页王航 余若黔 
蛋白质分子进化技术是一项新兴的基因工程技术,本文论述了其技术思想及技术手段的研究进展。
关键词：基因工程技术 技术手段 蛋白质 分子进化技术 易错PCR DNA改组 
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