孙自勇

作品数：25被引量：49H指数：4
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供职机构：南京大学更多>>
发文主题：纯化大肠杆菌细胞色素C重组人尿激酶原多肽更多>>
发文领域：生物学医药卫生轻工技术与工程化学工程更多>>
发文期刊：《南京师大学报（自然科学版）》《安徽大学学报（自然科学版）》《南京大学学报（自然科学版）》《东南大学学报（自然科学版）》更多>>
所获基金：国家科技重大专项国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目国家教育部博士点基金更多>>
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重组抑肽酶的表达纯化和活性测定被引量：2
《南京大学学报（自然科学版）》2007年第5期457-463,共7页陆嵬 马志峰 陈均勇 汤逢源 孙自勇 刘建宁 
高等学校博士点学科专项科研基金(20060284016);新世纪优秀人才支持计划(2006)
抑肽酶是一种用途广泛的丝氨酸蛋白酶抑制剂.用基因重组技术将化学合成的抑肽酶基因插入表达载体pET28a,并转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导后,表达产物以包涵体形式存在于菌体内包涵体纯化后经复性及CM-阳离子交换层析后,从每...
关键词：抑肽酶 纤溶酶 表达 纯化 抑制 
重组刺桐胰蛋白酶抑制剂的制备及活性鉴定(英文)
《南京大学学报（自然科学版）》2005年第5期462-469,共8页马志峰 孙自勇 陈均勇 刘建宁 
刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI)是一种Kunitz型胰蛋白酶抑制剂,能够抑制胰蛋白酶及组织型纤溶酶原激活剂的活性,因此ETI可以作为配体与固定相偶联用于亲和层析.利用化学合成及聚合酶链式反应(PCR)的方法获得ETI的编码基因,然后用NdeI/SacI酶...
关键词：刺桐胰蛋白酶抑制剂(ETI) 胰蛋白酶 瑞替普酶 纤溶酶 抑制 
Kunitz抑制剂家族成员抑肽酶对纤溶酶原活化的抑制作用(英文)
《南京大学学报（自然科学版）》2005年第5期478-488,共11页王莹 孙自勇 刘建宁 
抑肽酶属Kunitz抑制剂家族成员,能够抑制激肽释放酶、纤溶酶及胰蛋白酶的蛋白水解活性.研究表明,抑肽酶能够抑制尿激酶型-纤溶酶原激活剂(u_PA)和组织型-纤溶酶原激活剂(t_PA)对纤溶酶原的激活,但不影响u_PA和t_PA对小分子底物的酰胺水...
关键词：抑肽酶 丝氨酸蛋白酶 Kunitz抑制剂 抑制作用 尿激酶型纤溶酶原激活利 组织型纤溶酶原激活剂 
rhBACE的克隆、表达纯化与活性测定
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第2期164-169,共6页郭志刚 张巍 陈新园 傅一工 孙自勇 刘建宁 
教育部重大科技项目 (0 0 -0 3 ) ;教育部博士点基金 (2 0 0 2 840 2 5)
将重组人酸性蛋白水解酶原 (rh_proBACE)基因克隆到原核表达载体 pET2 8a质粒中 ,构建了pET2 8a_rh_proBACE重组表达载体 ,并在大肠杆菌菌株Rosetta中进行表达 .包涵体中的表达产物溶于 6mol/L盐酸胍 ,经Ni_Sepharose亲和层析纯化后 ,...
关键词：rhBACE 克隆 表达 纯化 活性测定 Β分泌酶 阿尔茨海默病 BACE rh-proBACE 
重组人脑钠素在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定被引量：4
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第1期34-40,共7页孙自勇 朱镇华 陈均勇 刘莉莉 张巍 杨庆 张菁 刘建宁 
人脑钠素(hBNP，human brain natriuretic peptide)是心室分泌的由32个氨基酸组成的多肽激素．临床研究表明，hBNP是治疗充血型心衰竭的一种安全有效的多肽药物．化学合成脑钠素全基因，以pET32a为表达载体，构建了硫氧还蛋白-脑钠素(th...
关键词：重组人脑钠素 大肠杆菌 表达 纯化 鉴定 肠激酶 酶解 多肽激素 
牛肠激酶轻链在毕赤酵母中的分泌表达、纯化和活性鉴定被引量：12
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第1期41-48,共8页孙自勇 陈均勇 陈新园 汪晶 田鹏鹏 吴盛 刘建宁 
国家重大科技专项"创新药物和中药现代化"(2002AA2Z3451)
　用RT＿PCR扩增肠激酶轻链(EKLC,EnterokinaseLightChain)的cDNA,并克隆至酵母分泌型表达质粒pPICZαA中.将重组质粒pPICZαA/EKLC转化至表达宿主pichiapastorisGS115,经甲醇诱导,目标蛋白EKLC表达并分泌至酵母培养基中.采用Zn＿Sephar...
关键词：肠激酶 毕赤酵母 分泌表达 纯化 酶切 免疫印迹 丝氨酸蛋白水解酶 
重组人胸腺肽α1在大肠杆菌中的表达纯化和鉴定
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第1期49-57,共9页吴盛 陈新园 陈均勇 刘莉莉 朱镇华 孙自勇 张燕 刘建宁 
用PCR将化学合成的人胸腺肽α1基因扩增并克隆到pMD18-T载体中，经过KpnI／SacI酶切、连接将胸腺肽基因插入到表达载体pET32b中硫氧还蛋白下游．将重组质粒转化至表达宿主BL21(DE3)中，经IPTG诱导，Zn—Sepharose亲和层析纯化以及复性...
关键词：胸腺肽 大肠杆菌 表达 纯化 鉴定 酶解 
重组人甲状旁腺激素(1-34)在大肠杆菌中的表达与纯化
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第1期58-65,共8页陈均勇 陈新园 孙自勇 刘莉莉 朱镇华 汪晶 吴盛 王石泉 刘建宁 
国家重大科技专项"创新药物和中草药现代化"(2002AA2Z3451)
　将化学合成的rhPTH(1 34)基因用PCR扩增后,克隆至表达载体pET＿35b(+),使rhPTH(1 34)融合于纤维素结合结构域(CBDclos)的羧基端,并得到高效表达.融合蛋白经纤维素树脂亲和层析纯化后,经FactorXa裂解释放出rhPTH(1 34),再通过纤维素树...
关键词：甲状旁腺激素 大肠杆菌 表达 纯化 纤维素结合结构域 FACTOR Xa 
重组人尿激酶原氨基末端片段的制备及活性测定被引量：1
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第1期66-74,共9页汪晶 陈新园 孙自勇 姚宏伟 陈均勇 刘建宁 
教育部重大科技研究项目(00-03);杰出青年基金(30025011);教育部优秀青年教师资助计划
　尿激酶原的N 末端135个氨基酸片段包含了表皮生长因子结构域和环柄结构域,参与了尿激酶原和其受体的结合以及尿激酶原诱导的化学趋化活性.利用RT PCR,从人脐带静脉内皮细胞中克隆ATF基因.将ATF基因插入pET 29a(+)中构建表达质粒pET 29...
关键词：ATF 尿激酶受体 纯化 抑制 制备 活性测定 多肽 
重组人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体的工业化制备与性质研究被引量：1
《南京大学学报（自然科学版）》2004年第1期7-15,共9页朱镇华 孙自勇 陈于红 张菁 王石泉 杨庆 刘莉莉 丁楅森 陈新园 刘建宁 
国家重大科技专项"创新药物和中药现代化"(2002AA2Z3451)
　将含有人组织型纤溶酶原激活剂缺失变体(K2tPA)重组表达质粒的工程菌经10L种子罐培养及100L发酵,IPTG诱导表达,其表达量为占菌体总蛋白的20%,表达产物经体外变复性、TI Sepharose亲和层析、SP Sepharose离子交换层析,每100L发酵液得...
关键词：重组人组织型纤溶酶原激活剂 缺失变体 制备 发酵 活化 纯化 蛋白 
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