国家自然科学基金(39800028)

作品数：9被引量：11H指数：3
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大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基体外分子交联
《生物工程学报》2008年第8期1485-1489,共5页徐燕 高音 
国家自然科学基金项目(No.39800028)资助~~
为证明高音等提出的蛋白质交联三步假说,通过PCR技术扩增大肠杆菌L-酒石酸脱氢酶β亚基(L-tartrate dehydratase beta subunit,TtdB)野生型与Cys/Ser突变型目的基因,构建带6×His标签的诱导型表达载体pTrcHisC-TtdB。重组蛋白以包含体...
关键词：酒石酸脱氢酶β亚基 蛋白质交联 热诱导去折叠和氧化重折叠 二硫键 异肽键 
大肠杆菌酒石酸脱氢酶β亚基的克隆、表达、纯化及包涵体的复性
《首都师范大学学报（自然科学版）》2005年第3期68-71,共4页徐燕 李永海 刘凤华 席慧 周霞 高音 
国家自然科学基金项目(No.39800028);北京市科技新星计划项目(No.96128)
利用PCR技术从大肠杆菌BL21中获取酒石酸脱氢酶β亚基基因(TtdB),并将之克隆到质粒pUC18上,转化大肠杆菌DH5α细胞.经测序证明序列无误后,将之与表达载体pTrcHisC连接,在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和双波长扫描分析,确...
关键词：酒石酸脱氢酶β亚基 基因克隆 诱导表达 包涵体 复性 
突变型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因的合成被引量：3
《首都师范大学学报（自然科学版）》2005年第1期63-67,共5页刘凤华 席慧 周霞 李永海 徐燕 高音 
国家自然科学基金项目 (3 980 0 0 2 8);北京市科技新星计划项目 (9612 8)
利用PCR定点突变技术 ,以野生型大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因为模板 ,获取 3种突变型 (Cys85Ser,Cys15 1Ser,Cys85 15 1Ser)二氢叶酸还原酶 (DHFR)基因 .用限制性内切酶BamHⅠ与PstⅠ将 3种突变基因片段插入到克隆载体pUC18上 ,进行蓝...
关键词：突变型 二氢叶酸还原酶 酶基因 大肠杆菌 DHFR 定点突变技术 UC 筛选 野生型 利用 
大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化被引量：3
《首都师范大学学报（自然科学版）》2005年第1期79-83,共5页李永海 徐燕 席慧 刘凤华 周霞 高音 
国家自然科学基金项目 (No .3 980 0 0 2 8);北京市科技新星计划项目 (No .9612 8)
谷氨酸脱氢酶是生物体内最主要的氧化脱氨基酶类 ,为了进一步研究其功能 ,我们以大肠杆菌DH5α菌株基因组DNA为模板和相应的寡聚脱氧核苷酸为引物 ,进行PCR扩增大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶基因 (NADP specificglutamatedehydrogenas...
关键词：谷氨酸脱氢酶 大肠杆菌 高效表达 DH5Α 特异性 酶基因 双波长扫描 克隆 DNA片断 表达载体 
大肠杆菌二氢叶酸还原酶基因folA的克隆、表达纯化及分子间交联
《生物技术通讯》2004年第4期346-349,共4页刘凤华 席慧 高音 周霞 万平 何红伟 
国家自然科学基金(39800028);北京市科技新星计划(96128)
利用PCR技术从大肠杆菌DH5α中获取二氢叶酸还原酶(DHFR)基因folA。用限制性内切酶BamHI与PstI将该片段插入到克隆载体pUC18上,DNA测序鉴定目的基因。而后再将该基因亚克隆到表达载体pTrcHisC上,IPTG诱导表达重组蛋白。在非变性条件下,...
关键词：大肠杆菌 二氢叶酸还原酶 基因 热诱导去折叠 二硫键 蛋白质交联 克隆 表达 
大肠杆菌硫氧还蛋白thioredoxin基因的克隆及表达被引量：1
《首都师范大学学报（自然科学版）》2004年第4期62-65,70,共5页席慧 刘凤华 李永海 徐燕 高音 
国家自然科学基金资助项目 (No .3 980 0 0 2 8)
以大肠杆菌XL1blue为模板 ,通过PCR技术扩增大肠杆菌硫氧还蛋白基因 ,并将目的基因分别连接到克隆载体pUC18和表达载体pTrcHisC上 ,构建重组质粒 .重组质粒pTrcHisC TRX在大肠杆菌中高效表达 ,最后利用固定化金属螯合亲和层析技术 (IMAC...
关键词：硫氧还蛋白 大肠杆菌 高效表达 克隆 UC 重组质粒 扩增 目的基因 表达载体 固定化 
鸡溶菌酶和重组大肠杆菌融合蛋白(NADP-GDH)体外分子交联的初步研究
《首都师范大学学报（自然科学版）》2004年第S1期73-78,共6页李永海 徐燕 席慧 刘凤华 周霞 高音 
国家自然科学基金项目 (No .3 980 0 0 2 8);北京市科技新星计划项目 (No .9612 8)
　用PCR方法克隆的大肠杆菌NADP特异性谷氨酸脱氢酶 (NADP specificglutamatedehydrogenase ,NADP GDH)基因和其突变基因 ,插入表达载体pTrcHisC构建重组蛋白质表达体系 .经过IPTG诱导表达 ,用Talon固定化金属亲和层析树脂纯化出重组的...
关键词：蛋白质分子间交联 二硫键 异肽键 热诱导去折叠 
蛋白质交联的研究进展被引量：3
《生物技术通报》2004年第4期10-13,共4页刘凤华 席慧 高音 
国家自然科学基金项目 (NO .3 980 0 0 2 8);北京市科技新星计划项目 (NO .9612 8)
蛋白质共价交联不但存在于一些生理过程 ,还与一些神经性疾病的发病机理相关。本文综述国内外 3种观点 ,阐述蛋白质由功能体 /单体转变成交联的二聚体
关键词：蛋白质交联 异肽键 二硫键 朊蛋白性脑病 谷氨酰胺转移酶 分子机理 
人肽基脯氨酰顺反异构酶基因的克隆、表达、纯化及热变性交联被引量：1
《首都师范大学学报（自然科学版）》2004年第2期52-56,65,共6页周霞 刘凤华 席慧 万平 何宏伟 高音 
国家自然科学基金项目 (No .3 980 0 0 2 8) ;北京市科技新星计划项目 (No .9612 8)
蛋白质分子间交联是普遍存在的现象 .然而 ,蛋白质交联的分子机理还不太清楚 .为了进一步探测蛋白质交联的分子机理 ,以及交联能否在异源肽链间发生 ,本实验室克隆了人肽基脯氨酰顺反异构酶 (humanPeptidylproly cis trans isomerase ,h...
关键词：肽基脯氨酰顺反异构酶 克隆 基因表达 纯化 CYCLOPHILIN 固定化金属亲和层析 构象病 热变性交联 
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