重叠延伸PCR法

作品数:22被引量:94H指数:5
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相关作者:张变玲张镜宇郭刚戴芳王宝利更多>>
相关机构:华中科技大学广东省农业科学院西北大学山东农业大学更多>>
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重叠延伸PCR法构建华支睾吸虫磷酸甘油酸变位酶突变体CsPGM-H190Q
《黑龙江畜牧兽医》2016年第12期158-160,共3页徐振彪 史雪君 姜庆玲 任重敢 薛乐 宋林霞 
山东省自然科学基金项目(ZR2011HM065)
为了研究华支睾吸虫磷酸甘油酸变位酶的活性位点,试验通过生物信息学分析和重叠延伸PCR的方法,对该酶的底物结合位点进行突变,得到突变体基因CsP GM-H190Q,将其克隆至表达载体pET-24b(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG进...
关键词:重叠延伸PCR 华支睾吸虫 磷酸甘油酸变位酶 突变体 H190Q 纯化 
重叠延伸PCR法合成栀子两个糖基转移酶基因被引量:5
《生物技术》2015年第5期451-457,462,共8页王晓云 雷志强 王邵华 王鹏良 
江西省卫生厅中医药科研基金课题("栀子糖基转移酶基因的克隆与功能分析";No.2012A142);国家自然科学基金项目("栀子果实中西红花总苷合成途径CCD基因的筛选与功能分析";No.31360362);江西省自然科学基金项目("栀子玉米黄素剪切加双氧酶基因的克隆与功能分析";No.20122BAB205070)资助~~
[目的]糖基转移酶UGT94E5和UGT75L6催化栀子果实中西红花总苷生物合成途径的末端步骤。该研究利用重叠延伸PCR法,合成编码这两个酶的基因序列。[方法]首先将基因分段,每段两端均加上p UC57载体的多克隆位点作为接头,拼接成800 bp以下的...
关键词:基因 合成 栀子 糖基转移酶 重叠延伸PCR法 
重叠延伸PCR法克隆蓖麻蚕β-FFase同源基因被引量:1
《蚕桑茶叶通讯》2014年第3期4-7,共4页张蕾 李静 戴伟宏 孟艳 
国家自然科学基金项目(31172270)
本研究利用重叠延伸PCR的方法成功获得蓖麻蚕两个β-FFase基因ScSuc1和ScSuc2全长ORF,为今后研究ScSuc1和ScSuc2的体外表达以及分析酶活特征奠定了必要的实验基础。
关键词:蓖麻蚕 家蚕 Β-呋喃果糖苷酶 重叠延伸PCR 
一种改进后的重叠延伸PCR法对被孢霉重组载体的构建被引量:2
《生物技术通报》2013年第9期62-67,共6页孟祥亮 王宁新 牛丽华 李培光 李洋 黄大卫 
国家自然科学基金项目(NSFC 31101634)
为了提高DNA大片段的拼接效率,通过引入逐次退火的PCR的方法,改良了传统的重叠延伸PCR方法。逐次退火PCR法,一方面延长了重叠区的PCR引物长度;另一方面把原来在1个循环中1个退火温度改成若干个,逐次降低退火温度,适用于Tm值相差比较大...
关键词:逐次退火 重叠区域PCR 突变 拼接 
重叠延伸PCR法定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶基因被引量:4
《中国生物制品学杂志》2013年第5期670-674,共5页叶程 邵坤彦 王亚南 覃桂 代风娇 何冬兰 
湖北省自然科学基金资助项目(2010CDZ046)
目的通过重叠延伸PCR法,定点突变微生物产谷氨酰胺转氨酶(Microbial transglutaminase,MTG)基因。方法根据GenBank中登录的Streptomyces sp.H197基因中MTG序列及重叠延伸PCR定点突变技术的原理,利用DNA-MAN5.0软件设计引物,以提取的Stre...
关键词:谷氨酰胺转氨酶 重叠延伸聚合酶链反应 点突变 
TAT PTD-Tachyplesin融合基因的重叠延伸PCR法合成被引量:6
《安徽农业科学》2013年第4期1438-1441,共4页邱道寿 刘晓津 王军 苏永全 
广东省自然科学基金(06025389);福建省博士后项目
为探讨HIV-Tat蛋白转导域(protein transduction domain,PTD)对中国鲎抗菌肽tachyplesin的协同作用,试验以经毕赤酵母密码子优化后的tachyplesin成熟肽(54 aa)加TAT PTD(11 aa)的cDNA序列为参考模板,设计了6条单链寡核苷酸片段,首尾引物...
关键词:PTD TAT 鲎素 重叠延伸PCR 
重叠延伸PCR法构建β地中海贫血基因突变质粒标准品被引量:3
《中国卫生检验杂志》2012年第10期2350-2353,共4页余玲玲 冯晶晶 田可港 王慧燕 郑晓群 
温州市科技计划资助项目(Y20100036);浙江省医药卫生科技计划资助项目(2011RCA030);浙江省公益性技术应用研究计划资助项目(2011C37042)
目的:构建含β地中海贫血(简称β地贫)-28(A>G)与IVS-2-654(C>T)突变基因的质粒标准品。方法:以含β珠蛋白野生型基因的质粒DNA为模板,采用重叠延伸PCR(Overlap extension PCR,OE-PCR)定点诱变后行TA克隆的方法分别构建含-28(A>G)与IVS-...
关键词:Β地中海贫血 基因突变 重叠延伸PCR 定点诱变 
重叠延伸PCR法合成EV71 VP1-LTB融合基因及其原核表达被引量:2
《中国微生态学杂志》2011年第5期385-389,共5页李江 马永平 李世彬 贺志良 姜柯安 
国家自然科学基金项目(30972585)
目的用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得人肠道病毒71型vp1与大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位(ltb)的融合基因,构建EV71 VP1-LTB融合表达质粒并在原核系统表达。方法设计14对引物通过重叠延伸PCR技术合成vp1基因,以ETEC(44815)...
关键词:人类肠道病毒71型vp1 大肠埃希菌不耐热毒素B亚单位 融合表达 重叠延伸PCR 
重叠延伸PCR法构建小菜蛾化学感受蛋白1基因突变体研究被引量:3
《西北农林科技大学学报(自然科学版)》2011年第1期119-125,共7页任珍珍 刘晶晶 柳晓磊 陈永 李珣 胡美英 
国家自然科学基金项目(31071713);教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目(20094404110019)
【目的】探索重叠延伸PCR法在昆虫化学感受蛋白基因点突变上的应用,研究半胱氨酸(Cys32)对小菜蛾(Plutella xylostella)化学感受蛋白1(PlxyCSP1)结合特性的影响。【方法】用计算机软件模拟PlxyCSP1上Cys32突变前后的蛋白三级结构以及与...
关键词:小菜蛾 化学感受蛋白1 重叠延伸PCR 原核表达 同源建模 分子对接 
重叠延伸PCR法构建VPS4B基因定点突变真核表达载体被引量:5
《临床检验杂志》2011年第1期57-59,共3页王维鹏 夏剑波 李磊 郝友华 杨东亮 
国家"十一五"传染病防治重大专项资助项目(2008ZX10003-011)
目的构建含液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)基因定点突变的真核表达载体。方法用RT-PCR法从HuH-7细胞中扩增VPS4B基因,并克隆到真核载体pXF3H上。采用重叠延伸PCR定点突变技术,构建K180Q和E235Q两种突变质粒,经DNA测序确证定点突变的结果,...
关键词:细胞液泡蛋白质分选因子4B 重叠延伸PCR 定点突变 真核表达载体 
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