易错PCR

作品数：113被引量：249H指数：8
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分子改良提高甘露聚糖酶的耐热性被引量：1
《湖北农业科学》2023年第12期151-153,162,共4页王亚伟 薛强 熊海容 
湖北省技术创新重大项目(2018ABA093)。
以来源于嗜热放线菌(Thermobifida fusca)的甘露聚糖酶基因(KJ806638)为研究对象,利用易错PCR方法对其进行改造,获得了耐热性进一步提高的甘露聚糖酶。筛选获得的N16I突变株,其最适反应温度从72.5℃提升到77.5℃。差示扫描荧光定量(DSF...
关键词：甘露聚糖酶 易错PCR 热稳定性 
草生欧文氏菌中酪氨酸酚裂解酶的体外定向进化及结构模拟
《化学与生物工程》2023年第7期34-39,44,共7页郭小雷 
福建省中科院STS院省合作重大项目(2022T3004)。
以来源于草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)的酪氨酸酚裂解酶(Eh-TPL)为目的基因,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,利用高通量筛选方法获得了比酶活提高的突变体S20C和E202R,再通过定点突变得到突变体S20C/E202R/N161S。经摇瓶发...
关键词：易错PCR 定向进化 草生欧文氏菌 酪氨酸酚裂解酶 L-酪氨酸 
定向进化Rho1提高酿酒酵母的乙醇耐受性和超高浓度乙醇发酵性能
《微生物学杂志》2023年第2期10-20,共11页谭慧萍 王惠国 赵增彤 程杨好 刘晨光 王亮 李倩 
国家自然科学基金计划项目(31500040);微生物代谢国家重点实验室开放课题项目(MMLKF20-09);辽宁省教育厅科研项目(J2020099);大连市青年科技之星项目(2019RQ104)。
燃料乙醇发酵过程中酿酒酵母细胞活性被高浓度乙醇严重抑制而导致发酵提前终止,生产强度严重降低,因此构建同时具有高耐受性、高发酵性能的菌株一直是发酵工业追求的目标。选取酿酒酵母细胞形态调节关键基因小GTP酶家族成员Rho1,构建易...
关键词：酿酒酵母 乙醇胁迫 Rho GTP酶 易错PCR 超高浓度乙醇发酵 
易错PCR技术提高嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL催化活性的研究被引量：1
《食品工业科技》2022年第18期130-136,共7页曾静 郭建军 袁林 
国家自然科学基金地区科学基金项目(32160579);江西省杰出青年科学基金项目(20202ACBL215001);江西省主要学科学术和技术带头人培养计划(20212BCJ23033)。
嗜热酸性Ⅲ型普鲁兰水解酶TK-PUL在液化条件下可完全水解淀粉为淀粉糖,在“液化糖化一步法”的淀粉制糖工艺中具有巨大的应用潜力。本研究拟采用易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术提高TK-PUL的催化活性。经过两轮...
关键词：Ⅲ型普鲁兰多糖水解酶 定向进化 易错聚合酶链式反应(易错PCR) 高通量筛选技术 催化活性本 
黑曲霉β-甘露聚糖酶ManA耐热突变体的筛选被引量：3
《中国酿造》2022年第3期62-68,共7页李珊珊 刘德海 刁文涛 陈晓飞 权淑静 
中原科技创新领军人才项目(214200510011);河南省科学院杰青人才培养项目(201405005)。
为了改造黑曲霉(Aspergillus niger)来源的β-甘露聚糖酶ManA,获得耐热性高的突变体。利用易错聚合酶链式反应(PCR)技术对构建的表达质粒pGAPZαA-manA进行随机突变,将突变文库转化至毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,表达筛选耐热性高...
关键词：甘露聚糖酶 耐热突变体 易错PCR 定点突变 
易错PCR定向进化技术提高蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10核酸酶活性的研究被引量：1
《化学与生物工程》2022年第2期23-27,51,共6页王珏 吴娜 张育敏 闫海洋 胡丽丽 
山西省自然科学基金面上项目(201901D111339);山西省高等学校科技创新项目(2020L0407,2020L0420);山西中医药大学科技创新能力培育计划(2020PY-JC-06,2021PY-JC-06)。
以分子伴侣skp修饰的蒙古黄芪病程相关蛋白AmPR-10(Astragalus membranaceus pathogenesis-related protein-10)全基因为模板,通过易错PCR定向进化技术构建突变体文库,以酵母tRNA为底物建立高通量筛选方法,获得了核酸酶活性提高的AmPR-1...
关键词：易错PCR 定向进化 AmPR-10 核酸酶活性 
易错PCR技术在脂肪酶的定向进化中的应用
《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》2021年第11期262-263,293,共3页戴丽 赵莎 邹远军 
脂肪酶是生物体内重要的代谢酶,广泛存在于动物、植物和微生物中,控制着消化、吸收、脂肪重构和脂蛋白代谢等过程。微生物产生的脂肪酶具有作用多、易于培养、产量丰富等特点而被广泛用于工业生产,其中热稳定脂肪酶的研究和开发更是具...
关键词：易错PCR 脂肪酶 定向进化 分子改造 
大肠杆菌氨基转移酶的非天然氨基酸底物特异性研究
《湖北大学学报（自然科学版）》2021年第4期377-384,470,共9页何婷 倪雪晨 张萍萍 陈茹 宋晶晶 雷佳 王行国 
武汉市科技局对外科技合作与交流项目(200970634271)资助。
氨基转移酶催化L-氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移.TLC(薄层层析)和甲臜颜色反应检测大肠杆菌4种氨基转移酶(TyrAT、IlvAT、AspAT和AvtAT)催化6种非天然氨基酸的转氨活性,发现AvtAT和AspAT无非天然氨基酸转氨活性.TyrAT能催化DL-高苯丙...
关键词：氨基转移酶 非天然氨基酸 易错PCR 底物特异性 最适温度 
基因突变提高毕赤酵母表达内切β-1,3-葡聚糖酶活性
《食品与生物技术学报》2021年第2期57-64,共8页金树霞 王力 朱莉 李菲菲 刘丽萍 詹晓北 郑志永 高敏杰 
国家自然科学基金项目(31301408);江南大学自主科研计划重点项目(JUSRP51632A);江苏省重点研发计划(现代农业)项目(BE2018367)。
为构建一株高效表达内切β-1,3-葡聚糖酶的毕赤酵母菌株,并用于水解热凝胶生产β-1,3-葡寡糖。作者首先对哈茨木霉来源内切β-1,3-葡聚糖酶基因进行随机突变,并构建BGN13.1a突变库;然后采用高通量技术及刚果红平板筛选高表达菌株;最后采...
关键词：内切β-1 3-葡聚糖酶 毕赤酵母 易错PCR 酶学性质 
β-1,4-葡聚糖内切酶的定向进化被引量：1
《化学与生物工程》2021年第2期53-56,共4页郭成栓 杨桂玲 刘晓珊 
广东省中医药局科研项目(20182101);广东食品药品职业学院自然科学基金项目(2016YZ018)。
根据阳性转化子在IPTG诱导下可以在LB-CMC平板上产生水解圈的原理,在初筛和摇瓶复筛的基础上,采用易错PCR法对β-1,4-葡聚糖内切酶基因进行定向进化,从阳性转化子中筛选酶活提高的突变菌株。突变酶活性是野生酶的1.32倍,催化效率约为野...
关键词：β-1 4-葡聚糖内切酶 定向进化 易错PCR 
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