套叠PCR

作品数：13被引量：63H指数：4
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用毕赤酵母表达理氏木霉的β-葡萄糖苷酶基因
《生物技术》2012年第3期31-33,共3页林海鹏 沈锦城 尹慧祥 张泽华 张爱联 
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(IT-BB120503)资助
目的:为提高β-葡萄糖苷酶的产量,用毕赤酵母取代理氏木霉用于生产,以弥补理氏木霉在大规模生产中的缺陷。方法:用套叠PCR法从理氏木霉基因组中扩增β-葡萄糖苷酶基因(bglⅠ)。用T4DNA连接酶和限制性DNA内酶将bglⅠ重组于P.pastoris表...
关键词：Β-葡萄糖苷酶 毕赤酵母 套叠PCR 基因表达 酶活力 
定点突变巴曲酶在毕赤酵母中的克隆与表达被引量：5
《蛇志》2011年第2期105-110,共6页王宏英 徐梅 兰海英 杨宇 张宏杰 李娜 薛雁 薛百忠 
目的为避免毕赤酵母分泌的Kex2蛋白酶对发酵液中所表达的巴曲酶的降解。利用重叠PCR方法对巴曲酶基因进行定点突变,将巴曲酶基因第45位的Arg突变为Lys。方法将突变后的基因克隆到酵母分泌型表达载体pPICZαA中,将重组载体酶切线性化后...
关键词：突变巴曲酶 类凝血酶 巴斯德毕赤酵母 克隆和表达 偏好密码子 套叠PCR 
短C肽人胰岛素原突变体的设计与其编码基因的套叠PCR合成
《中国食品工业》2011年第5期81-82,共2页王倩 马建忠 王永刚 吴玉冰 
本研究由兰州理工大学博士启动基金、甘肃省自然科学基金B类重点、国家人事部留学归国人员择优资助项目资助.
基因工程人胰岛素作为第一个基因工程药物，自其使用以来解决了许多糖尿病人的疾苦。其后开展的一系列基因工程人胰岛素突变体的研究，发现了一些或长效或速效或高活性的突变体，丰富了治疗用胰岛素的类型。本文根据NCBI数据库中人胰岛...
关键词：胰岛素原 突变体 套叠PCR 
应用套叠PCR技术构建番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA植物表达载体
《生命科学研究》2010年第5期393-397,共5页吴金燕 言普 沈文涛 黎小瑛 周鹏 
国家自然科学基金资助项目(30760134;30960218);海南省自然科学基金资助项目(808186);中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(ITTBZD07-32);海南大学热带作物种质资源保护与开发利用教育部重点实验室开放课题
植物真核翻译起始因子4E(eIF4E)在蛋白质合成的起始中发挥重要作用,参与植物-病毒互作,影响病毒的侵染过程.为了研究eIF4E在植物病毒侵染中的功能,建立了一种快速的套叠PCR新方法,成功构建了番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的hpRNA结构,并将...
关键词：HPRNA 植物表达载体 套叠PCR eIF4E基因 eIFiso4E基因 
利用套叠PCR技术合成人胰岛素原基因的临床研究
《中国现代医药杂志》2010年第2期8-11,共4页马建忠 周贤婧 王永刚 
甘肃省自然科学基金资助项目;项目编号(3ZS062-B25-O23)
目的设计并分子克隆适宜于大肠杆菌表达系统的人胰岛素原基因。方法以美国国家基因库(GenBank)发布的人胰岛素原的氨基酸序列为模板,参考大肠杆菌表达系统的密码子偏好性以及所用表达载体(pGEX-3x)的特点,经计算机分析、设计人胰岛素原...
关键词：套叠PCR(SOE-PCR) 人胰岛素原 Klenow片段 基因克隆 
以P型PRSV-VPg为模板多位点突变获得W型PRSV-VPg的研究被引量：2
《生命科学研究》2009年第2期104-108,共5页胡正龙 肖旭倩 沈文涛 言普 周鹏 
国家自然科学基金资助项目(30760134)
以P型PRSV-VPg(Papaya Ringspot Virus,VPggene)基因为模板利用高保真酶通过两对引物(突变4个位点),PCR扩增获得一条276bp和一条141bp的两个小片段.以此为基础,利用长引物延伸和套叠PCR的方法,定点突变剩余5个位点,最后拼接获得W型PRSV-...
关键词：艘Sy—yPg 基因改造 长引物延伸 套叠PCR. 
大仓鼠β_2肾上腺素受体基因的套叠PCR法多点突变研究被引量：5
《生命科学研究》2008年第1期45-49,共5页王迪 黄园园 杨曙明 于洪峡 杨啸枫 
科技部"科研院所社会公益研究专项"项目(2005DIB4J040)
对大仓鼠β2肾上腺素受体蛋白(β2 adrenergic receptor,β2AR)进行立体结构与疏水性分析.利用套叠PCR法对β2AR基因进行多点突变,将保守跨膜域疏水氨基酸突变为正电荷亲水氨基酸,成功构建分别带有7个与3个突变氨基酸的原核突变表达载体...
关键词：β2肾上腺素受体基因 G蛋白偶联受体 套叠PCR 突变 
利用套叠PCR技术改造人可溶性TRAILcDNA片段及真核表达载体的构建被引量：3
《生命科学研究》2006年第4期309-312,共4页朱明月 沈文涛 周鹏 
海南省教育厅科研基金项目(Hjkj200507)
利用套叠PCR技术对可溶性TRAIL基因片段(sTRAIL,114aa-281aa)的“KEX2”位点及“ATTTA”位点分别进行改造,并构建真核表达载体;结果表明:成功获得了3种突变基因:sTRAILK、sTRAILA以及sTRAILAK,并成功构建了4种分泌型酵母表达载体:pPICZ...
关键词：肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL) 套叠PCR 基因突变 真核表达载体 
芦丁鼠李糖苷酶基因多位点突变的修复被引量：1
《大连轻工业学院学报》2006年第1期47-50,共4页封雪 鱼红闪 
国家自然科学基金资助项目(30371744;30470055;20476017);辽宁省高等学校优秀人才支持计划资助项目(RC-04-05);辽宁省科学技术基金资助项目(20042132)
任何与原模板不匹配的碱基都可掺入到PCR产物中,形成“不配或错误”。该现象为创造定点突变,基因修复提供了简便易行的方法。利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对芦丁鼠李糖苷酶基因的多个突变位点进行修复,获得100%的修复成功率。
关键词：套叠PCR DNA聚合酶 突变 
利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶进行基因多位点突变的研究被引量：6
《生命科学研究》2004年第1期28-31,共4页周鹏 沈文涛 黎小瑛 
2002年中国热带农业科学院重点方向资助项目
利用套叠PCR和高保真DNA聚合酶对人工合成的牛口蹄疫病毒VPI基因(FMDV-VPl,Foot-Mouth Disease Virus-VPl)的5个突变位点进行修复,修复的成功率为100％。
关键词：套叠PCR 高保真DNA聚合酶 基因突变 修复 重叠区扩增基因拼接法 
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