国家高技术研究发展计划(2006AA10Z305)

作品数：16被引量：58H指数：5
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建立高通量筛选耐热胆固醇氧化酶的方法被引量：2
《化工进展》2011年第3期612-615,共4页孙艳 杨海麟 王武 
国家863计划项目(2006AA10Z305)
建立了一种以滤膜为基础的高通量筛选耐高温胆固醇氧化酶产生菌的方法。利用酶偶联及胆固醇不溶于水的特性产生显色透明圈。酶的热处理过程和酶与底物的反应过程分开,有效地防止酶在热处理前与底物反应。高温处理是在滤膜上进行,从而克...
关键词：胆固醇氧化酶 高通量筛选 定向进化 
乳糖诱导重组大肠杆菌表达胆固醇氧化酶的研究被引量：2
《食品与生物技术学报》2011年第3期470-474,共5页李闯 孙艳 张玲 杨海麟 王武 
国家863计划项目(2006AA10Z305);江南大学青年科学基金项目(2009LQN03)
采用乳糖诱导胆固醇氧化酶(COD)基因在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,研究了培养基成分、乳糖浓度、诱导时间和诱导温度对胆固醇氧化酶表达的影响。结果显示,在对诱导条件进行优化控制的前提下,胆固醇氧化酶酶活达到15.2 U/mL。研究结果为乳...
关键词：胆固醇氧化酶 乳糖诱导 重组 
高密度培养重组E-coli产胆固醇氧化酶的乳糖诱导策略被引量：2
《食品工业科技》2011年第2期162-165,共4页杨海麟 王长城 张玲 辛瑜 孙艳 王武 
国家863计划课题资助项目(2006AA10Z305);江南大学青年科学基金(2009LQN03);工业生物技术教育部重点实验室基金资助项目(KLI-KF200505)
研究了乳糖诱导重组大肠杆菌表达胆固醇氧化酶。结果表明,乳糖不仅可以作为诱导剂诱导外源蛋白的合成,而且能作为碳源促进菌体的生长。通过对诱导条件的优化,实现了重组大肠杆菌的高密度培养,最高密度达68.9(OD600);在此基础上确定了最...
关键词：胆固醇氧化酶 乳糖 补料流加 诱导时机 
重组大肠杆菌产胆固醇氧化酶的指数流加策略被引量：3
《化工进展》2010年第1期130-133,共4页孙艳 王长城 张玲 杨海麟 王武 
国家863计划资助项目(2006AA10Z305)资助
以指数流加策略高密度培养重组大肠杆菌,发酵生产胆固醇氧化酶。通过对比生长速率的分阶段控制使得细胞干重达40.128g/L。确定了最佳的诱导时机为菌体对数生长期的中期,产酶速率为1287.31U/(L·h)。菌体产酶水平达6436.56U/L,生产强度为...
关键词：胆固醇氧化酶 高密度培养 指数流加 诱导时机 
Arg引入“Ser/Thr”平面对木聚糖酶XynⅡ热稳定性的影响被引量：4
《西北农林科技大学学报（自然科学版）》2010年第1期46-52,共7页周晨妍 王武 邬敏辰 
国家"863"高新技术研究与发展计划项目(2006AA10Z305)
【目的】为了提高来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)的高比活木聚糖酶XynⅡ的热稳定性,对其热稳定性影响因素进行改造。【方法】对木聚糖酶XynⅡ进行同源建模和序列比较,在XynⅡ的"Ser/Thr"平面引入精氨酸的四点诱变和五点诱变,对...
关键词：宇佐美曲霉 木聚糖酶 热稳定性 定向诱变 “Ser/Thr”平面改造 
高密度培养重组大肠杆菌发酵生产胆固醇氧化酶的策略
《工业微生物》2009年第6期25-29,共5页王长城 孙艳 张玲 王武 杨海麟 
国家863计划课题资助项目(2006AA10Z305);工业生物技术教育部重点实验室基金资助项目(KLI-KF200505)
以重组大肠杆菌发酵生产胆固醇氧化酶,依据溶解氧的变化控制底物的流加速率,实现了重组大肠杆菌的高密度培养,最高密度达85(OD600)。在此基础上确定了最佳的诱导时机为发酵中期,菌体产酶水平达.583(1.6U/L,产酶速率为971.77 U·L-1·h-1...
关键词：胆固醇氧化酶 分批补料 诱导时机 
信号肽对短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中表达的影响被引量：2
《工业微生物》2009年第5期25-29,共5页张玲 杨海麟 王龙刚 沈微 邬敏辰 王武 
国家"863"计划课题资助项目(2006AA10Z305);工业生物技术教育部重点实验室基金资助项目(KLIB-KF200505)
从Brevibacterium sp.DGCDC-82染色体DNA中扩增出含信号肽序列的胆固醇氧化酶结构基因,插入大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-COD(s+)。以pET28a-COD(s+)为底物,扩增出不合信号肽的胆固醇氧化酶结构基因,构建成重组质粒p...
关键词：信号肽 BREVIBACTERIUM sp.DGCDC-82 胆固醇氧化酶 原核表达 
重组E.coli胆固醇氧化酶的分离纯化及其酶学性质研究被引量：2
《生物技术通报》2009年第5期64-68,共5页钟学敏 张玲 孙艳 杨海麟 王武 
国家"863"计划课题资助项目(2006AA10Z305);工业生物技术教育部重点实验室基金资助项目(KLI-KF200505)
对重组E.coli产生的胆固醇氧化酶采用70%硫酸铵盐析、CM Sepharose FF离子层析、Phenyl Sepharose 6 Fast疏水层析、Sephadex G-75凝胶过滤,得到的胆固醇氧化酶在SDS-PAGE上呈单一蛋白质条带,酶的纯化倍数为93,收率为21%。部分酶学性质...
关键词：胆固醇氧化酶 重组E.coli 分离纯化 酶学性质 
产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件的优化被引量：8
《食品与生物技术学报》2009年第5期670-674,共5页杨海麟 王长城 张玲 孙艳 白洁 王武 杨建勋 
国家863计划项目(2006AA10Z305);工业生物技术教育部重点实验室基金项目(KLI-KF200505)
在摇瓶中对产胆固醇氧化酶重组大肠杆菌的发酵培养基和诱导条件进行了优化,优化培养基为甘油10 g/L,胰蛋白胨10 g/L,酵母粉5 g/L,KH2PO42 g/L,K2HPO44 g/L,Na2HPO4.12 H2O7 g/L,(NH4)2SO41.2 g/L,NH4Cl 0.2 g/L,MgSO4.7 H2O1 g/L;优化...
关键词：重组E.coli JM109/pTrc99a—COD 胆固醇氧化酶 培养基优化 诱导条件优化 
微生物胆固醇氧化酶的研究进展被引量：7
《食品科学》2009年第9期225-229,共5页张玲 杨海麟 孙燕 霍惠芝 王武 
工业生物技术教育部重点实验室基金项目(KLIB-KF200505);国家"863"计划项目(2006AA10Z305)
微生物来源的胆固醇氧化酶在医疗诊断、食品加工、生化制药、抗虫基因工程等方面具有良好的应用价值,引起了国内外学者的广泛关注,并开展了大量的研究工作。本文就胆固醇氧化酶的种类、酶学性质、结构、功能、应用及近年来基因工程等方...
关键词：胆固醇氧化酶 酶学性质 结构 应用 基因工程 
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